細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90％）。根據細胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養基。2、制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管，一管將質粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中，輕輕搖動平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。注：每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。3、培養6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養基，繼續培養，16h左右可以觀測到報告基因的表達。如何優化PEI轉染試劑轉染時的比例？不同分子量PEI轉染試劑溶解度

1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優化。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題，歡迎咨詢上海曼博生物。也可關注我們的公眾號：Mine-bio，查看更多技術文章！科研級PEI轉染試劑中國代理權PEI MAX 是一款高度濃縮的粉劑，大量科學家選擇PEI MAX ，在內部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑。

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。Polysciences 是一家化學品制造公司，產品廣泛應用于各個科研領域。公司成立于1961年，起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案，幫助科學家揭示未知領域。更多關于Polysciences PEI相關產品信息，歡迎咨詢上海曼博生物！也歡迎關注我們的公眾號：Mine-bio，查看更多技術文章！

產品特點：PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式（LinearPolyethylenimineHydrochloride），是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產品。相比于PEI25K，PEIMAX40K：1.完全水解（去乙?；?.鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性；3.含更長連續性乙烯亞胺片段，其質子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應用領域：PEIMAX40K（cat#24765）是一款非GMP等級的PEI轉染試劑，適用于基礎學術研究和藥物研發早期階段，以固體粉末形式提供，需用戶自行配置（詳情見使用方法）。更多關于KyforaBiobyPolysciencesPEI轉染試劑，歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉染試劑的工作原理是什么？

注意事項質粒質量：請務必使用高質量轉染級無內質粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8~2.0的范圍之內）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養細胞。歡迎關注曼博生物公眾號：Mine-bio如何辨別假的PEI轉染試劑？廣東PEI轉染試劑官方代理

哪個品牌的PEI轉染試劑性價比高？不同分子量PEI轉染試劑溶解度

PEIMAX粉末配置方法：1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中；2)放入攪拌轉子，放置于磁力攪拌器上，設置攪拌程序以形成一個較小的漩渦；3)等待PEIMAX40K完全溶解，通常需要5分鐘左右；4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1；5)如果不小心超過7.1，則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1；6)將溶液轉移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L；7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉染試劑溶液；8)按需分裝，4°C儲存（切記不可冷凍）；注：未經配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中，并且保存在4℃的轉染試劑將可在6個月之內保持性能。如jin用于蛋白定性研究，分裝的轉染試劑可延長有效使用期至1年。
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