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cGMP級PEI轉染試劑使用說明

來源: 發布時間:2025-06-29

穩定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。若想咨詢更多關于PEI轉染試劑相關信息,歡迎咨詢上海曼博生物!為什么PEI轉染試劑配制的過程中要加酸?cGMP級PEI轉染試劑使用說明

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瞬時轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后5h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。更多關于PEI轉染試劑相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!PolyplusPEI轉染試劑官方代理商無需復雜操作,PEI試劑簡化基因導入流程。

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對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-Bio,查看更多技術文章!

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。Polysciences轉染與遞送相關產品已正式移交Kyfora Bio,相關產品標簽將變更為Kyfora Bio by Polysciences,后續購買請認準備新品牌。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!用PEI轉染時,一般和DNA的比例是?

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產品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產品。相比于PEI25K,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙酰化);2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性;3.含更長連續性乙烯亞胺片段,其質子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應用領域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉染試劑,適用于基礎學術研究和藥物研發早期階段,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法)。或者關注我們的公眾號:Mine-bioPEI轉染試劑使用的時候有什么注意事項?速溶型PEI轉染試劑價格

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產品簡介Transporter5轉染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉染試劑)溶液,由PEIMAX配置而成,采用0.1umPES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復合物,這些復合物很容易通過內吞作用進入細胞,并且Transporter5-DNA復合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,有效提高轉染效率。適用于工藝開發、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業化生產。Transporter5轉染試劑能高效地將DNA轉染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲(SF9、SF21)等真核細胞系,可作用于大到135,000個核苷酸的質粒,所以較大的質粒也可以成功地轉染。Transporter5可節省試劑準備時間,加快項目進度。經過嚴格的性能檢測,確保品質,在新藥研發過程中是一款快速、重復性好、可用于批量產的轉染試劑。更多關于KyforaBiobyPolysciencesPEI轉染試劑,歡迎咨詢上海曼博生物!cGMP級PEI轉染試劑使用說明

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