細(xì)胞增殖的能力是評(píng)價(jià)細(xì)胞、代謝、生理、病理狀況、細(xì)胞活性、基因毒性等的重要指標(biāo)之一，細(xì)胞增殖雖然與多種因素有關(guān)，比如細(xì)胞代謝活性、與細(xì)胞增殖相關(guān)的蛋白表達(dá)、ATP的濃度等等，但是檢測(cè)細(xì)胞增殖現(xiàn)象的*直接*準(zhǔn)確的方法就是用熒光探針直接檢測(cè)遺傳物質(zhì)DNA的合成，這種方法是研究細(xì)胞增殖、信號(hào)通路、DNA修復(fù)及分化等等方向常用的方法。目前，基于DNA的合成原理，人們*初開發(fā)了工具是BrdU染色法,但是這種方法操作耗時(shí)長(zhǎng)，往往需要過夜處理細(xì)胞，操作繁雜，比如需要DNA變性、抗原修復(fù)以及抗原抗體反應(yīng)等操作，后來在BrdU的基礎(chǔ)上，人們開發(fā)出了革命性的探針--EdU，這種方法不需要繁雜的操作，節(jié)約時(shí)間，且反應(yīng)更靈敏和準(zhǔn)確。并且與MTT/WST-1或者CCK-8這種依靠化學(xué)顯色法只能得到一個(gè)折線圖的方法相比上海東寰告訴您使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的便捷性。天津EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒哪家好

EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會(huì)影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時(shí)，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長(zhǎng)狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時(shí)的孵育時(shí)間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度湖北正規(guī)EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒公司EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒在社會(huì)上的重要性。

細(xì)胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細(xì)胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘，以中和過量的多聚甲醛；(c)棄甘氨酸溶液，每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細(xì)胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細(xì)胞通透溶液；(e)每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；該產(chǎn)品是采用成像檢測(cè)方法對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理，固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測(cè)。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)

EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制活性，適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面的研究，尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實(shí)驗(yàn)。與BrdU檢測(cè)方法相比，EdU檢測(cè)方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU染料只有BrdU抗體的1/500，在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等），可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更準(zhǔn)確地反映DNA復(fù)制活性。上海東寰告訴您EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的運(yùn)用方式。

建議染色完成后立即進(jìn)行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請(qǐng)于4°C條件下避光濕潤(rùn)保存3天之內(nèi)完成拍照。若為細(xì)胞爬片或涂片，可使用抗熒光淬滅封片劑進(jìn)行封片后于4°C條件下保存及拍照檢測(cè)。而EdU檢測(cè)方法不需要?jiǎng)×业腄NA變性，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識(shí)別位點(diǎn)，操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性上海東寰告訴您什么是EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒？上海哪一家EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購(gòu)買

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