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江蘇高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

來源: 發布時間:2024-07-08

用于離心柱中糖蛋白去膠基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的FucosEXO酶,用于糖蛋白的去氟糖基化,而不會用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去膠基化。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. z終樣品中不含酶。有效去除α1-2,3,4連接巖藻糖:分析用復雜聚糖結構修飾的糖蛋白可能具有挑戰性,需要高效和特異性的酶學工具。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖殘基,無需輔助因子或添加使用OpeRATOR圖譜O-聚糖位點對依那西普進行LC-MS分析。江蘇高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

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糖蛋白性能測試:O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和劉易斯結構。分析用這種復雜的聚糖結構修飾的糖蛋白可能具有挑戰性,需要高效和特異性的酶工具。我們在許多糖基工程TNFR蛋白上測試了Genovis的FucosEXO,這些蛋白攜帶多達11個O-聚糖,這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時內對所有三種 TNFR 蛋白進行去巖藻糖磺酸處理,而用其他巖藻糖酶處理導致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。江蘇高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發依那西普是一種 Fc 融合蛋白,具有高度 O-糖基化的鉸鏈區域。

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Genovis的OglyZOR 是一種內切糖苷酶(O-糖苷酶),可特異性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖,用于糖分析、確認 O-糖的存在和降低樣品的異質性。Genovis的OglyZOR 是一種內切糖苷酶(內切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶),可催化來自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸,因此,由唾液酸酶混合物組成的唾液酸凍干,用于去除α2-3,α2-6和α2-8連接的唾液酸,與OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下獲得良好活性。

G0F 抗體在 30 分鐘內:半乳糖的存在會影響zhiliao性抗體引發的效應功能,為了研究抗體的作用方式,可能需要徹底去除半乳糖殘留物。Genovis的GalactEXO Immobilized 的 β1-4 半乳糖苷酶活性在曲妥珠單抗上使用 30 分鐘孵育證明。genovis的GalactEXO Immobilized 由強大的 GalactEXO 酶組成,該酶固定在瓊脂糖珠上,并以易于使用的微離心柱形式格式化。GalactEXO是β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白上的半乳糖殘基。使用FabRICATOR?將抗體消化成亞基,并使用LC-MS進行分析。使用 GalactEXO 凍干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的轉變,但后者在z終制劑中沒有留下酶。沒有任何半乳糖基化結構表明半乳糖殘基完全水解,因此LC-MS數據中任何剩余的次要峰都可以注釋為亞基的糖化。沒有任何半乳糖基化結構表明半乳糖殘基完全水解,因此LC-MS數據中任何剩余的次要峰都可以注釋為亞基的糖化。FucosEXO 可在 1 至 2 小時內水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 。

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C1抑制劑的去糖基化:在O-糖基化生物制藥的生產過程中,由于he心GalNAc殘基的加工不完全,可能會出現Tn抗原。這表現為具有 203 Da HexNAc 單位差異的重復質量位移。為了確認 Tn 抗原的存在,可以應用以下工作流程,此處在重度(26 個位點)O-糖基化 C1 抑制劑上演示。首先,使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖,使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能測試?:依那西普是另一種具有挑戰性的生物制藥模型分子,攜帶 13 個 O-聚糖位點,其中平均 9 至 10 個位點被占用。使用 GalactEXO 凍干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的轉變。海南PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供,包含4 個 GlycOCATCH。江蘇高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR用于攜帶N-和簡單O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 試劑盒包括:OmniGlyZOR 微離心柱;PNGase F 凍干;RapiGest?* SF表面活性劑。除非底物蛋白變性,否則某些 N-糖基化位點很難或無法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在變性條件下使用試劑盒中包含的PNGase F凍干和RapiGest? SF表面活性劑通過額外的去糖基化步驟去除。使用Genovis的OpeRAT對EPO進行O-糖位點特異性消化:對于jin攜帶一個或幾個 O-糖基化位點的簡單底物蛋白,OpeRATOR 也可用于繪制中間水平的 O-糖基化位點。 江蘇高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

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