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天津凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

來源: 發布時間:2024-07-17

genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖:為了確認依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數據,進行了釋放的N-聚糖分析。標記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失,如半乳糖基化聚糖物種的信號丟失所示。該酶是一種有價值的工具,可降低樣品異質性,用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc;2. 實現完全糖基去除,以改善蛋白質表征;3. 可固定在即用型離心柱中。SialEXO在天然條件下水解糖蛋白,在pH值范圍為6.5至9時顯示出活性。天津凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

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C1抑制劑的去糖基化:在O-糖基化生物制藥的生產過程中,由于he心GalNAc殘基的加工不完全,可能會出現Tn抗原。這表現為具有 203 Da HexNAc 單位差異的重復質量位移。為了確認 Tn 抗原的存在,可以應用以下工作流程,此處在重度(26 個位點)O-糖基化 C1 抑制劑上演示。首先,使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖,使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能測試?:依那西普是另一種具有挑戰性的生物制藥模型分子,攜帶 13 個 O-聚糖位點,其中平均 9 至 10 個位點被占用。吉林凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數據,進行了釋放的N-聚糖分析。

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GalNAcEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的GalNAcEXO酶,用于水解糖蛋白上的GalNAc殘基,而不會用酶污染制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. 終樣品中不含酶。用于水解離心柱中糖蛋白上的Genovis的GalNAc殘基的固定化酶。GalNAcEXO 酶是一種n 外α-N-乙酰半乳糖氨酸酶,可快速有效地水解來自天然 O-糖蛋白的 z es GalNAc 殘基。 該酶來源于Akkermansia muciniphila,在大腸桿菌中表達,帶有His標簽,分子量為52 kDa。 該酶在 Tn 抗原和 α1-3 連接末端 GalNAcs 上均顯示活性。在這里,我們展示了如何使用GalNAcEXO來表征復雜的生物制藥。

用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物。Genovis的SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 個單位的小瓶中,用于 2 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。用于水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶。 Genovis的SialEXO 2-3凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在500個單位的小瓶中,用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。 與唾液酸酶混合物 SialEXO 相比,SialEXO 2-3 是一種 α2-3 特異性唾液酸酶,允許對 α2-3 連接的唾液酸進行靶向分析。O-和N-糖基化蛋白的高效α2-3去唾液酸化可以在1小時內實現。評價抗體片段對完整蛋白聚集的影響:可使用Genovis的IgdE酶(FabALACTICA?)和PNGaseF酶。

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當在完整狀態下進行分析時,EPO的聚糖異質性導致了非常復雜的質譜圖。通過在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時,可以有效地去除 N 糖(含有PNGase F酶)和 O-糖,如對應于未修飾蛋白質的單個峰所示。EPO上殘留了少量用乙酰化唾液酸修飾的O-聚糖,因為OmniGLYZOR對這種結構的水解效率低下。根據制造商Genvois的建議(在37°C下進行O/N孵育),兩種底物蛋白也用另一種市售的去糖基化產物處理,并顯示數據以供比較。另一方面,N-聚糖在內質網中翻譯地連接到未折疊的蛋白質上。這導致某些 N-糖基化位點難以被 Genovis的PNGase F 接近,或者一旦底物蛋白折疊成其天然狀態,就根本無法接近。因此,這種N-聚糖的水解需要底物蛋白以與酶活性相容的方式變性。使用FabRICATOR?將曲妥珠單抗消化成亞基,并使用LC-MS進行分析。遼寧瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 個單位的小瓶中。天津凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力,用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應條件在一小時內有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖,以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當加入RapiGest?并在變性條件下進行反應時,西妥昔單抗的所有N-聚糖(包括Fab-聚糖)在PNGase F固定化10分鐘內完全去除,PNGase F固定化15分鐘內完全去除。在變性反應條件下,PNGase F 在 30 分鐘內成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應條件,將常用的糖蛋白標準品RNase B在10或15分鐘內完全去糖基化,分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。天津凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

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