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浙江用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

來源: 發布時間:2024-09-05

Genovis 是一家瑞典生物技術公司,自2010年起,為生物制藥公司提供SmartEnzymes?工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學工具,主要用于生物制藥行業和學術界。 我們在全球范圍內提供創新的智能酶SmartEnzymes?,用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發、生產和質量控制。您可以在我們的網站上“Application頁面”獲得更多應用信息,如果您有興趣,可以和我們一起做一個“SmartStories”,也可以聯系我們。?Genovis測試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。浙江用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

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由于蛋白質的O-糖模式的異質性和O-糖結構的OpeRATOR特異性,形成了重疊的肽,從而可以獲得O-糖位點的完整圖譜為了進行比較,相同材料的標準胰蛋白酶消化物, 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進行O-糖位點定位:OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產生攜帶O-糖的糖肽,并能夠使用質譜法進行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點的示意圖。浙江用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發連接的巖藻糖殘基,而對于非常復雜的樣品可能需要更長的孵育時間。

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GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成,均帶有His標簽,組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率; 3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!將混合物加載到GlycOCATCH上,洗滌樹脂,并用8M尿素洗脫結合的肽。純化后,在RP-LC-MS上分離樣品。數據顯示,糖苷酸肽的選擇性純化,攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集:IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區域。胰蛋白酶消化IgA后,將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上,并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預期的 O-糖基化鉸鏈肽富集,具有不同程度的糖基化。

與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR用于攜帶N-和簡單O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 試劑盒包括:OmniGlyZOR 微離心柱;PNGase F 凍干;RapiGest?* SF表面活性劑。除非底物蛋白變性,否則某些 N-糖基化位點很難或無法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在變性條件下使用試劑盒中包含的PNGase F凍干和RapiGest? SF表面活性劑通過額外的去糖基化步驟去除。使用Genovis的OpeRAT對EPO進行O-糖位點特異性消化:對于jin攜帶一個或幾個 O-糖基化位點的簡單底物蛋白,OpeRATOR 也可用于繪制中間水平的 O-糖基化位點。 FucoseEXO固定在離心柱中,可快速方便地處理高達0.5mg的糖蛋白,然后在離心步驟中輕松收集消化的糖蛋白。

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Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接巖藻糖殘基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖結構分析以及寡糖的外切糖苷酶陣列的寶貴工具。1. 高效α-巖藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖;2. 可靠的酶解增加了對外切糖苷酶陣列的信心;3. 可固定在即用型離心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的凍干酶。Genovis的FucosEXO凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于2mg糖蛋白的去碳基化。SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成,每種唾液酸酶都具有獨特的活性,并且它們同時起作用。福建凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶

依那西普是一種 Fc 融合蛋白,具有高度 O-糖基化的鉸鏈區域。浙江用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

從依那西普水解β1-3和β1-4半乳糖:Genovis的GalactEXO Immobilized 對 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖均具有酶活性,這些半乳糖存在于裝飾有 N- 和 O-連接糖基化的生物制藥中,例如 Fc-融合蛋白依那西普。將依那西普與GalactEXO固定化孵育60分鐘,并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亞基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分別分析。與GalactEXO Immobilized孵育導致N-連接和O-連接聚糖上的半乳糖殘基水解,這在半乳糖基化物種中被視為信號丟失。對游離的N-聚糖分析證實了LC-MS數據。浙江用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

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