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江蘇固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

來源: 發布時間:2024-11-15

Genovis的PNGase F(肽 N-糖苷酶 F)是一種糖酰胺酶,可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動物天冬酰胺連接復合物、雜交或高甘露糖寡糖的內層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。該酶用于MS分析前的樣品制備,以降低蛋白質異質性并實現游離的聚糖分析,并研究N-聚糖的功能作用。1. 對所有哺乳動物N-聚糖的高效水解;2.對多種糖蛋白具有活性;3.可固定在即用型離心柱產品形式;4. 自動化友好型,96孔板,用于高通量 N-糖去除。Genovis的ImpaRATOR 是一種 O-糖依賴性蛋白酶,可消化攜帶粘蛋白型。O-聚糖的蛋白質,包括唾液酸化物質、糖基化絲氨酸和 Thr 殘基的 N-末端。該酶產生攜帶 O-糖的糖肽,從而實現 O-糖譜分析、位點占用測定和 O-糖肽圖譜以及使用 LC-MS 分析的中級方法。1. 特異性廣 - 接受多種 O-聚糖變體,包括唾液酸化物種;2. 可靠O-聚糖特異性蛋白酶 – 消化絲氨酸/蘇氨酸糖基化位點的 N 末端;3. 穩健的消化,增強復雜生物制藥的表征。為了測試選擇性,將一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白與 GlycOCATCH 一起孵育:洗脫O-糖基化蛋白。江蘇固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

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GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成,均帶有His標簽,組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率; 3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!將混合物加載到GlycOCATCH上,洗滌樹脂,并用8M尿素洗脫結合的肽。純化后,在RP-LC-MS上分離樣品。數據顯示,糖苷酸肽的選擇性純化,攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集:IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區域。胰蛋白酶消化IgA后,將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上,并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預期的 O-糖基化鉸鏈肽富集,具有不同程度的糖基化。云南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學研究SialEXO固定化酶含有與瓊脂糖珠共價偶聯的SialEXO酶,用于糖蛋白的去唾液酸化,而不會被酶污染z終制劑。

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用于水解離心柱中糖蛋白上的N-聚糖的固定化酶。 Genovis的PNGase F 固定化微離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的 PNGase F 酶,用于在樣品中酶峰減少的糖蛋白上水解 N-糖。 將糖蛋白樣品與PNGase F一起在離心柱中固定,然后通過離心步驟輕松收集去糖基化的蛋白質。由于空間位阻,PNGase F對某些糖蛋白的活性可能緩慢或受到抑制 - 在這些情況下可能需要更長的孵育時間或糖蛋白變性。 Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.2 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3.z終樣品中的酶峰減少。

Genovis的GlycOCATCH?是一種親和樹脂,可特異性結合O-糖基化(粘蛋白型)蛋白和肽,從而實現簡單的工作流程,以富集和純化攜帶O-聚糖的蛋白質和肽。洗滌離心柱,并用8M尿素洗脫結合的蛋白質。對洗脫材料的分析表明,由于洗脫O-糖基化蛋白,并且樹脂與非糖基化蛋白和N-糖基化蛋白的結合可以忽略不計。選擇性結合 O-糖蛋白:為了測試選擇性,將一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白與Genovis的GlycOCATCH 一起孵育。為了在肽水平上研究Genvois的GlycOCATCH的O-糖特異性,將O-glcyosyled肽(糖蛋白)與一系列未修飾的肽混合。Genvois展示了使用兩種zhiliao蛋白作為底物的OmniGLYZOR的性能:依那西普和促紅xibao生成素 (EPO)。

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使用Genovis的OpeRATOR圖譜O-聚糖位點對依那西普進行LC-MS分析:依那西普是一種 Fc 融合蛋白,具有高度 O-糖基化的鉸鏈區域。將依那西普與OpeRAT一起孵育,并使用LC-MS/MS分析所得糖肽。促紅xibao生成素 (EPO) 是一種具有單個 O-糖基化位點的 ~30 kDa 糖蛋白。在PNGase F去除N-糖并使用SialEXO進行去唾液酸化后,用OpeRAT消化天然蛋白,并通過反相LC-MS分析所得蛋白質片段。O-糖基化的位點可以通過識別OeRATOR消化位點直接推斷出來。為了獲得良好性能,需要去除唾液酸助劑,因此購買中包括2000個單位(如果SialEXO凍干)。1. 用于方法開發的靈活產品形式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。O-聚糖是OpeRATOR活性所必需的,而該酶在N-聚糖上沒有活性。OpeRATOR和SialEXO處理后,O-糖基化蛋白被消化成攜帶O-聚糖的肽。消化發生在O-糖基化位點的N端。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強相互作用。海南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成,均帶有His標簽,組分的分子量為87 kDa和109 kDa。江蘇固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

Genvois的SialEXO產品是唾液酸酶,用于N-和O-糖基化蛋白的有效去唾液酸化。SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成,每種唾液酸酶都具有獨特的活性,并且它們同時起作用。一種酶對α2-3、α2-6和α2-8連接的唾液酸具有很好的活性,另一種酶(SialEXO 2-3)通過α2-3-鍵快速水解唾液酸。SialEXO凍干可在2小時內去除天然蛋白質上的所有唾液酸。SialEXO在天然條件下水解糖蛋白,在pH值范圍為6.5至9時顯示出活性。這些酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。兩種酶都含有 His 標簽,酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。 江蘇固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

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