Medium-Salt Active Nuclease High Quality (M-SAN HQ,中鹽核酸酶),是用Pichia pastoris表達(dá)的重組非特異內(nèi)切核酸酶,廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)工藝流程中,在生理鹽條件下去除雙鏈及單鏈的DNA及RNA。這款核酸酶的適宜pH范圍很廣(pH 7.2-8.7),且在125-250 mM鹽濃度內(nèi)具有適宜活性。在細(xì)胞培養(yǎng)液或收獲的培養(yǎng)上清中,不需調(diào)整任何組分,直接加入M-SAN HQ即可表現(xiàn)高核酸酶活性。相比傳統(tǒng)的全能核酸酶,M-SAN HQ中鹽核酸酶在生理鹽條件下,對(duì)HCD的去除更高效、更徹底。因此,M-SAN HQ中鹽核酸酶非常適合部分病毒載體(如慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒及溶瘤病毒等)的生產(chǎn)。江蘇中鹽核酸酶服務(wù)哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。福建ArcticZymes中鹽核酸酶70950-150
M-SAN HQ中鹽核酸酶發(fā)揮酶活性的條件比較廣。例如,該酶適宜的鹽濃度(NaCl)范圍是0mM-225mM,能耐受400mM NaCl濃度。適宜反應(yīng)溫度為20℃-37℃,能耐受4℃-40℃。Mg2+濃度大于0.5mM即可,在4-15mM范圍即可表現(xiàn)更高活性。跟其他核酸酶不同,M-SAN HQ中鹽核酸酶不是堿性核酸酶,其適宜pH為7.2-8.7,能耐受6.3-8.7。綜合這些特點(diǎn),在生理鹽條件下,M-SAN HQ的酶活是傳統(tǒng)全能核酸酶的5倍左右。因此,可以說(shuō)M-SAN HQ是更適合生理鹽條件下的核酸酶。浙江M-SAN中鹽核酸酶上海中鹽核酸酶價(jià)格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
文章作者按照經(jīng)典的慢病毒載體生產(chǎn)流程操作,在融化、核酸酶消化、澄清、超濾等步驟留樣,分別檢測(cè)dsDNA濃度及功能性LV病毒滴度。經(jīng)過(guò)分析發(fā)現(xiàn),——去除主要發(fā)生在澄清環(huán)節(jié),能去除dsDNA的80%-90%;2. M-SAN HQ中鹽核酸酶比Benzonase能更高效去除dsDNA,即M-SAN HQ組的TFF回流液中dsDNA殘留量是Benzonase組回流液的20%左右;3. LV病毒滴度在澄清環(huán)節(jié)損失30%-40%;4. M-SAN HQ組的TFF回流液中LV病毒滴度略高于Benzonase組的回流液數(shù)據(jù)。
此外,文章作者對(duì)每個(gè)步驟的樣品進(jìn)行納米顆粒分析(NTA),結(jié)果發(fā)現(xiàn):澄清環(huán)節(jié)后,M-SAN HQ中鹽核酸酶和Benzonase處理組才出現(xiàn)比較明確的LV病毒顆粒峰;TFF處理后,回流液樣品的LV病毒顆粒峰更加尖銳,表明病毒顆粒分散度更好、穩(wěn)定性更高。回流液的NTA結(jié)果進(jìn)一步表明,M-SAN HQ中鹽核酸酶處理組只有一個(gè)病毒顆粒峰,而B(niǎo)enzonase處理組的回流液中有三個(gè)峰。作者推測(cè)Benzonase處理組的病毒顆粒還有嚴(yán)重的病毒團(tuán)聚現(xiàn)象,而呈現(xiàn)多峰現(xiàn)象。黃山中鹽核酸酶款式哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
ArcticZymes廠家對(duì)鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品(Salt Active Nucleases,SANs)的生產(chǎn)及質(zhì)控,在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上,增加了cGMP質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),如microbes、endotoxin、蛋白酶等,符合USP-EP要求。廠家提供HQ級(jí)別和GMP級(jí)別的SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶,從成本角度分別滿足臨床前和早期臨床階段、商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)階段的需求;且GMP級(jí)SAN HQ高鹽核酸酶已完成在FDA的藥物主文件(Drug Master File, DMF)申報(bào)備案,助力加快藥物申報(bào)流程。M-SAN HQ中鹽核酸酶不需調(diào)整培養(yǎng)基任何組分,使用簡(jiǎn)單方便;培養(yǎng)基條件中鹽核酸酶70950
中鹽核酸酶適宜pH范圍廣(pH7.2-8.7),且在125–250mM鹽濃度內(nèi)具有較高活性。福建ArcticZymes中鹽核酸酶70950-150
染色質(zhì)由組蛋白和DNA組成,——147個(gè)堿基對(duì)的DNA纏繞在8個(gè)組蛋白(由H2A、H2B、H3和H4形成的八聚體)周?chē)纬苫镜娜旧|(zhì)單位,即核小體。核小體像珠串一樣串連在一起,并被包裝成更高階的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。DNA帶負(fù)電荷,富含堿性氨基酸的組蛋白帶正電荷,且組蛋白多聚物有很多疏水區(qū)段。所有這些特點(diǎn)導(dǎo)致宿主DNA殘留(HCD)能吸附很多物質(zhì),包括宿主蛋白殘留(HCD)、色譜填料、目的病毒顆粒等,因此,HCD的存在增加了工藝流程的復(fù)雜度,同時(shí)也降低了病毒顆粒的穩(wěn)定性。福建ArcticZymes中鹽核酸酶70950-150