在傳統生物技術行業(如抗體、疫苗領域)使用的下游純化工藝步驟,已經用于慢病毒的大規模下游處理。主要是基于膜(過濾/澄清,利用切向流過濾TFF進行濃縮/滲濾,基于膜的色譜)和色譜(離子交換色譜IEC,親和色譜AC,體積排阻色譜SEC)的技術。這些不同的過程步驟的組合是可變的,在某些情況下,不同的純化方法可以用于相同的目的。此外,采用benzonase/M-SAN HQ中鹽核酸酶降解污染的DNA或者用于下游的一個步驟,或者用于病毒生產階段。在150mM NaCl條件下,M-SAN HQ中鹽核酸酶的酶切活性達到常規核酸酶的5倍左右。山東M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-160
細胞基因藥物領域的進展使得對高質量基因轉移技術的需求急劇增加,包括高質量慢病毒載體(LV)的大規模生產。宿主細胞DNA殘留(HCD)是一類主要的工藝相關雜質,對下游純化帶來很大挑戰。根據相關法規要求,需要去除HCD才能達到臨床級LV。HCD去除是通過核酸酶處理聯合下游工藝(DSP)共同實現的。文章作者研究了兩款核酸酶M-SAN HQ中鹽核酸酶(ArcticZymes Technologies)和Benzonase(Merck)對HCD去除效率的差別,其下游工藝包含過濾澄清及TFF超濾。山東M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-160江蘇中鹽核酸酶價格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
大規模生產階段,AAV/LV載體生產流程跟抗體、疫苗類藥物的生產類似,主要包含上游培養、下游純化及制劑部分。上游培養分為質粒開發、細胞擴增、三質粒共轉染及病毒載體生產等步驟。下游純化分為細胞裂解釋放AAV病毒顆粒(可以通過去污劑、機械作用、高滲或凍融操作等)or收獲細胞上清液得到含LV病毒原液、加入核酸酶以減少宿主細胞核酸污染、澄清是通過離心或過濾等方法去除細胞碎片和雜質等、超濾濃縮以減少后續色譜純化體系、親合及離子交換等純化得到高純度病毒載體。制劑部分主要是超濾更換緩沖液、過濾除菌及制劑灌裝等。
對于含包膜的病毒載體,如慢病毒LV、逆轉錄病毒RV等,在細胞培養上清液中收獲。而M-SAN HQ中鹽核酸酶,作為市場上更適合生理鹽條件的核酸酶,所以,M-SAN HQ成了包膜病毒載體生產的更好選擇。優勢在于:1. M-SAN HQ兼容多種細胞培養體系,在細胞培養鹽濃度條件下具有更優活性;2. M-SAN HQ酶活更高、酶切速度更快,縮短孵育時間;3. M-SAN HQ能夠高效剪切染色質到更小片段,簡化下游工藝流程;4. 相比Benzonase,M-SAN HQ用量減少1/2-2/3,降低了酶用量及生產成本。ArcticZymes廠家管控整個供應鏈及生產流程,協助客戶進行文件審計及現場審計。
文章作者對酶法去除dsDNA進行了優化研究,兩種酶濃度梯度為25U/ml、50U/ml及100U/ml,Mg2+濃度為5mM,通過PicoGreen檢測dsDNA含量。結果發現,25U/ml的M-SAN HQ中鹽核酸酶對dsDNA去除效果明顯優于100U/ml的Benzonase。此外,在酶切反應速度方面,M-SAN HQ有更明顯的優勢,——在低濃度底物dsDNA(如20ng/ml)條件下,50U/ml的M-SAN HQ在5分鐘內將dsDNA降解到2ng/ml左右;而50U/ml的Benzonase在30分鐘孵育消化后,dsDNA濃度依然是12ng/ml左右。M-SAN HQ中鹽核酸酶用在生產工藝流程中,在生理鹽條件下去除雙鏈及單鏈的DNA及RNA。山東生理鹽條件中鹽核酸酶70950-202
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在干細胞醫治領域, 某些疾病靠單純的細胞替代并不能取得滿意效果。利用逆轉錄病毒和慢病毒將外源目的基因整合到干細胞基因組,對基因功能缺失的遺傳病具有良好療效,但也存在一定致瘤風險。相比之下,CRISPR/Cas9基因編輯技術能夠精確實現基因敲入、敲除及堿基修復。因此, 采用CRISPR/Cas9基因編輯技術對干細胞進行基因改造,不僅能夠增加干細胞醫治的疾病范圍,也能更大程度地保證療效的安全性。目前,CRISPR/Cas9在干細胞醫治領域發揮著重要作用,同時更多由CRISPR/Cas9編輯的干細胞藥物正在開發中。山東M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-160