在不同的鹽濃度條件下,AAV病毒載體的存在形式不同。低鹽濃度條件下,AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結(jié)合到HCD上,從而產(chǎn)生病毒顆粒團(tuán)聚現(xiàn)象。隨著溶液鹽濃度上升,AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞,AAV病毒顆粒會逐漸解離。當(dāng)鹽濃度升到更高范圍(>400mM左右),AAV病毒顆粒與HCD的結(jié)合更弱,AAV顆粒更穩(wěn)定。因此,在高鹽濃度溶液中,AAV顆粒更加穩(wěn)定,且有數(shù)據(jù)表明高鹽濃度不會削弱AAV的侵染能力。所以,我們推薦提高AAV病毒生產(chǎn)中的鹽濃度。南京中鹽核酸酶產(chǎn)品質(zhì)量哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。云南70950-160中鹽核酸酶廠家直銷
監(jiān)管部門對HCD的殘留量有明確的規(guī)定。美國FDA發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品HCD殘余限度為 100pg/劑,對于大劑量生物制品如單克隆抗體,根據(jù)其殘留DNA來源及給藥途徑,殘留量可放寬至 10ng/劑。細(xì)胞基因藥物終產(chǎn)品的DNA殘留有兩種來源,分別是宿主細(xì)胞DNA(HCD)和轉(zhuǎn)染用的質(zhì)粒。質(zhì)粒和HCD的存在形式不同,去除效率也差別很大。其中,質(zhì)粒是裸露的DNA雙鏈,帶強(qiáng)負(fù)電荷,通過色譜純化主要是離子交換能夠很高效去除;HCD則是以核小體緊密折疊形成的染色質(zhì)形式存在,幾乎不以裸DNA形式存在,所以很難去除。北京綜合中鹽核酸酶國內(nèi)代理黃山中鹽核酸酶價格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
ArcticZymes Technologies提供獨(dú)特特性的鹽活性核酸酶(Salt Active Nucleases,SANs)系列產(chǎn)品,主要包含SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶。這兩款酶都是非特異核酸內(nèi)切酶,跟Benzonase一樣能高效降解任何形式(雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀)的DNA和RNA;都來自于深海microbes,通過Pichia pastoris發(fā)酵生產(chǎn)得到。這兩款酶的區(qū)別在于發(fā)揮酶活的適宜鹽濃度不同,——M-SAN HQ中鹽核酸酶的適宜鹽濃度在175mM-250mM,而SAN HQ高鹽核酸酶的適宜鹽濃度在400mM-600mM。
ArcticZymes Technologies推出了SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶,為生物工藝領(lǐng)域提供了革新性、更高效的方案來解決大規(guī)模生產(chǎn)中核酸殘留問題。此前,受限于鹽濃度和核酸酶活性的負(fù)調(diào)控效應(yīng),行業(yè)在核酸殘留去除效果和酶成本之間尋找平衡,更多的是讓工藝選擇適應(yīng)酶。此后,行業(yè)可以根據(jù)工藝具體需求而選擇更合適的酶產(chǎn)品,既能達(dá)到理想的去除效果,又能輕松控制酶用量及綜合成本,真正實(shí)現(xiàn)讓酶適應(yīng)工藝選擇。SAN HQ和M-SAN HQ為行業(yè)提供更高效率的解決方案。ArcticZymes廠家管控整個供應(yīng)鏈及生產(chǎn)流程,協(xié)助客戶進(jìn)行文件審計及現(xiàn)場審計。
在生物工藝流程中,需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染,而核酸酶作為外源成份,也需要在生產(chǎn)流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右,包裝了完整基因組DNA后的AAV病毒顆粒PI大致為5.9,來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,M-SAN HQ中鹽核酸酶pI 8.7左右。因此,在同樣的條件下,從LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。染色質(zhì)的雙螺旋結(jié)構(gòu)影響DNA的檢測與酶切處理,而中鹽核酸酶降解染色質(zhì)效率更高。青海綜合中鹽核酸酶廠家直銷
ArcticZymes精于規(guī)模化生產(chǎn)獨(dú)特特性的酶產(chǎn)品,于2005年在證券交易所上市。云南70950-160中鹽核酸酶廠家直銷
一般來說,生物生產(chǎn)工藝用的核酸酶以BenzonaseTM(BenzonaseTM是Merck的注冊商標(biāo))為主,能高效降解任何形式(雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀)的DNA和RNA。該酶來自于大自然界普遍存在的S.Marcescen,通過E.coli發(fā)酵生產(chǎn)得到。該酶的適宜反應(yīng)條件是低鹽濃度范圍(<100mM鹽濃度),且酶活隨著鹽濃度上升而下降,在300mM鹽濃度時酶活幾乎喪失。對于細(xì)胞基因藥物常用的兩種病毒載體LV和AAV,LV由于含有脂包膜結(jié)構(gòu)一般都在生理鹽條件下存在,而AAV在高鹽條件下不易團(tuán)聚、更穩(wěn)定。而在生理鹽濃度及更高濃度條件下,Benzonase活性受到抑制。云南70950-160中鹽核酸酶廠家直銷