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***做實驗需要用正常的細胞摸索合適的細胞密度和培養時間，確定之后再加實驗組，同時如果條件允許，設置一組已知高遷移性的細胞作陽性對照。注意細胞小室內外培養基的比例，不要使小室外培養基超過小室內培養基液面。觀察細胞時一定要擦去小室內部貼在膜上的細胞。 默克提供的相關產品： Millicell?細胞培養小室：PET膜懸掛式或PCF膜站立式，膜孔徑為5 μM或8 μM 藥物跨內皮細胞滲透性實驗 實驗目的： 研究某種藥物分子穿透內皮細胞的滲透率

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取上述200μL細胞液加入小室，下室（培養板）加入900L含有10% FBS的培養基。不同規格的小室和培養板所加的體積不同，具體參考Millicell?產品說明書。37°C孵育24至72小時，依據**細胞類型而定。孵育結束，小心取出細胞小室，吸掉小室上層培養液，PBS清洗一遍，70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min，0.5%結晶紫（2%乙醇或PBS溶解）染色20min，然后進行第8步或者第9步。PBS清洗兩次以去除多余的染料，立即用棉簽擦去濾膜上層的細胞，自然靜置風干。顯微鏡下觀察濾膜下層的細胞，隨機選取不同的視野計數并算平均值。結晶紫溶解濾膜下層細胞，然后用33%醋酸脫色，將結晶紫完全洗脫下來，洗脫液可在酶標儀上570nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細胞穿透不均勻帶來的誤差。上海益啟生物的酶詢價公司電話。徐匯區添加劑細胞培養參數

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