逆轉錄是一種重要的生物學現象,它在生物體內發揮著重要的作用。逆轉錄是指將RNA轉錄成DNA的過程,與正常的DNA轉錄成RNA的過程相反。這個過程由逆轉錄酶來完成,而逆轉錄酶是一種酶類蛋白質,普遍存在于病毒和一些細胞中。逆轉錄的重要性在于它是某些病毒的復制過程中...
分離外泌體的方法之超濾:樣品通過0.2μm聚醚砜(PES)膜過濾,較大的顆粒物質(如細胞碎片和凋亡體)被滯留出來。然后,包括外泌體在內的半處理濾液樣品通過TFF系統通過500kDa截止濾芯進行超濾過程,進料流速為120mL/min,跨膜壓力10:1,外泌體太大...
DNA提取試劑盒是根據氯化芐法構建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化芐具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細胞壁的特性。本制品利用了氯化芐的這一特性,將植物樣品凍結融解后,再使用PipetTip的前面將植物樣品在Microtube壁...
磁珠法DNA提取:磁珠法的原理是在磁珠表面修飾有對核酸有吸附作用的特定活性官能基團,通過不同的裂解液結合液洗滌液在特定的條件下能夠與目的物質進行特異性結合,同時利用磁珠自身的磁性,在外磁場的作用下可以方便的實現定向移動與富集,從而達到核酸與雜質分離的目的,進而...
RT-PCR逆轉錄中模板的選擇:在RT-PCR實驗中,選擇總RNA或純化的mRNA作為模板進行逆轉錄十分重要。mRNA雖然能提供略高的靈敏度,但總RNA經常使用,具有較mRNA更重要的優勢。首先,其過程需要較少的純化流程,這保證了更好的回收模板和更好的把結果標...
RNA逆轉錄實驗注意事項:去除基因組DNA污染:殘留的基因組DNA(gDNA)會對熒光定量結果造成很大的干擾,為了使結果更加的真實、可重復,我們需要去除gDNA干擾。我們可以在引物設計時避免gDNA的擴增,比如將上下游引物分別設在不同的外顯子上;或者在提取RN...
大多數逆轉錄酶都具有多種酶活性,主要包括以下幾種活性。①DNA聚合酶活性;以RNA為模板,催化dNTP聚合成DNA的過程。此酶需要RNA為引物,多為賴氨酸的tRNA,在引物tRNA3'-末端以5'→3'方向合成DNA。反轉錄酶中不具有3'→5'外切酶活性,因此...
分離外泌體的方法之降水:它是一種基于生物體液中外泌體的電荷沉淀的方法。帶負電荷的外泌體可以與PEG35,000Da基質中帶正電荷的魚精蛋白相互作用并形成沉淀。外泌體的回收和重懸比基于超速離心的分離更有效。聚合物沉淀法以更少的勞動力和昂貴的設備分離尿外泌體的潛在...
如何選擇DNA提取試劑盒?細胞系VS生物體:在選擇DNA提取試劑盒時,較重要的變量可能是你所使用的生物體。1.細菌:許多試劑盒都有用于細菌DNA分離的不同成分,這些試劑盒之間的主要區別在于細胞是如何被分解的,因為有些細菌比其他細菌更更有挑戰性。例如,形成生物膜...
如何選擇DNA提取試劑盒?細胞系VS生物體:1、植物:當涉及到植物DNA分離時,必須考慮到其他一些因素,需要注意污染物的去除。植物在純化過程中通常含有未分離的糖,因此,洗滌劑選擇性地與DNA結合并從溶液中析出,通常是先將洗滌劑溶解在高濃度的鹽溶液中,然后提取D...
逆轉錄試劑的應用:近年來,隨著基因編輯技術和基因療法的快速發展,逆轉錄試劑的應用范圍也在不斷擴展。例如,在CRISPR-Cas9系統中,逆轉錄試劑可以用來進行sgRNA的合成和優化,從而提高基因編輯的效率和精度。此外,逆轉錄試劑還可以用來合成DNA的反義鏈,從...
各類型試劑盒的原理:按照分離方法的不同,就可以將試劑再進行一個分類。例如上文的層析試劑、板式試劑和管式試劑。但是不得不說這個分類方法其實非常粗糙,主要是為了講一講免疫層析試劑而強行生搬硬造的。我們從簡單的板式試劑和管式試劑講起:板式試劑當中較典型的是ELISA...
RNA提取:1.凍存細胞與新鮮細胞的RNA提取有區別嗎?具體該怎么操作?新鮮細胞與凍存細胞RNA提取沒什么區別。千萬不能等細胞溶解了存狀態把Trizol直接加到凍存管了,一起化開,振蕩振蕩就可以了。與從組織中提RNA差不多。2.RNA得率低:該組織或者細胞中R...
如何選擇DNA提取試劑盒?細胞系VS生物體:在選擇DNA提取試劑盒時,較重要的變量可能是你所使用的生物體。1.細菌:許多試劑盒都有用于細菌DNA分離的不同成分,這些試劑盒之間的主要區別在于細胞是如何被分解的,因為有些細菌比其他細菌更更有挑戰性。例如,形成生物膜...
人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜...
外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法:尺寸排阻色譜(SEC)用于根據尺寸而非分子量分離大分子。該技術應用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子,該珠子含有多個孔和隧道。分子根據它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時間,而大分子從色譜柱中洗脫得較早...
活性蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織,如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等哺乳動物組織中提取蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對蛋白的降解,...
血漿DNA與血漿游離DNA提取試劑的選擇方法:血漿DNA,又稱血液循環DNA、游離DNA,是指血液中游離于細胞外的DNA,其來源主要有三:白細胞崩解釋放的DNA、壞死組織特別是腫組織釋放入血液的DNA和染上病毒、細菌的DNA。近幾年來,隨著基因診斷技術的發展,...
外泌體試劑盒簡易的操作步驟:預富集外泌體——50ul外泌體懸浮液+50ul捕獲磁珠——常溫過夜孵育——加入1xAssayBuffer1ml——加入5ul檢測抗體孵育——加入1xAssayBuffer1ml——加入1xAssayBuffer350ul——洗完后就...
各類型試劑盒的原理:按照分離方法的不同,就可以將試劑再進行一個分類。例如上文的層析試劑、板式試劑和管式試劑。但是不得不說這個分類方法其實非常粗糙,主要是為了講一講免疫層析試劑而強行生搬硬造的。我們從簡單的板式試劑和管式試劑講起:板式試劑當中較典型的是ELISA...
外泌體的表征分析:動態光散射:使用Anton-PaarLightsizer500粒子分析儀測定外泌體制劑中的粒度分布。動態光散射測量由于溶液中粒子的布朗運動引起的散射光強度的動態波動,(685nm的激光,檢測角度為15、90、175度);較小的粒子比較大的粒子...
逆轉錄酶的質量控制:1.切口酶:在與200單位酶37oC保溫60分鐘后,超螺旋質粒保留在90%以上。2.DNase測定:200單位酶與50ng3H-DNA37oC保溫60分鐘,分解出的放射性低于1%。3.RNase測定:200單位酶與50ng3H-RNA37o...
逆轉錄試劑在許多生物學和醫學領域中都有普遍的應用。例如,在病毒學研究中,逆轉錄試劑可以被用來檢測病毒RNA的存在和濃度。此外,在基因表達和基因調控的研究中,逆轉錄試劑也可以用來研究mRNA的表達模式和在細胞內的分布狀態。雖然逆轉錄試劑在研究中發揮著重要的作用,...
DNA檢測試劑盒的原理:細胞核染色質DNA斷裂是細胞凋亡的標志特征。在細胞發生凋亡時,核酸內切酶被開啟,選擇性降解染色質DNA,形成50-300kb的大片段,并進而在核小體連接處斷裂,形成180-200bp或其整倍數的DNA的片段,這些DNA的片段可從細胞中提...
試劑盒是用于盛放檢測化學成分、藥物殘留、病毒種類等化學試劑的盒子。它一般在醫院、制藥企業使用。試劑盒使用示例:試劑盒的產生正是為了使實驗人員能夠擺脫繁重的試劑配制及優化過程,所以試劑盒中一般配備有相應的使用說明書,用戶按照說明書只需少量的優化即可得到滿意的結果...
核酸提取,是分子生物學中較常見的基本操作,一般分為DNA提取與RNA提取,提取核酸的質量直接影響后續的檢測工作,暫對常見的問題進行了一個總結。DNA提取:1.A260/280比值較低?或者A260/280比值較高?用水作為洗脫液比較偏低,或者蛋白質殘留,但如果...
DNA提取試劑盒是根據氯化芐法構建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化芐具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細胞壁的特性。本制品利用了氯化芐的這一特性,將植物樣品凍結融解后,再使用PipetTip的前面將植物樣品在Microtube壁...
反轉錄酶的選擇:反轉錄酶(Reversetranscriptase)又稱逆轉錄酶。是以RNA為模板指導dNTP合成互補DNA(cDNA)的酶。一部分反轉錄酶具有RNA酶活性,能夠在轉錄后降解RNA-DNA雜交鏈中的RNA鏈。如果反轉錄酶沒有Rnase酶活性,可...
RT-PCR逆轉錄中模板的選擇:在RT-PCR實驗中,選擇總RNA或純化的mRNA作為模板進行逆轉錄十分重要。mRNA雖然能提供略高的靈敏度,但總RNA經常使用,具有較mRNA更重要的優勢。首先,其過程需要較少的純化流程,這保證了更好的回收模板和更好的把結果標...
植物基因組DNA提取試劑盒,操作步驟:用寬口吸頭輕輕吸取大約400ul上清于一個干凈的1.5ml離心管,盡量不要吸取沉淀,避免離心柱堵塞。6加入600u級沖液PDB(使用前請先檢查是否已經加入無水乙醇),充分混勻,此時可能會出現絮狀沉淀。將離心柱裝在收集管上,...