CIRCLE-Seq，將gDNA打斷并環化，環化的DNA與CRISPR/RNP孵育，NGS測序檢測線性化的DNapian段，確定脫靶位點。PCR富集后測序，成本相對較低，能檢測低頻脫靶突變。安必奇sgRNA脫靶效應評估，安必奇生物提供sgRNA脫靶效應評估服務，幫助您挑選高度特異，脫靶率低的sgRNA進行后續實驗。同時，我們也協助您檢測分析基因編輯后細胞樣品的脫靶情況，通過各種高通量測序檢測技術，我們能準確的分析全基因組范圍內的脫靶位點，推動CRISPR/Cas9技術在zhiliao藥物開發和臨床研究中的應用。我們的優勢：靈敏度高：能檢測低頻脫靶突變★準確性高：檢測結果可通過實驗驗證★多種檢測方法可選擇以滿足不同的實驗需求基因療法脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。江蘇種子基因脫靶檢測方法

細胞外檢測方法：細胞外檢測方法較為直接，將基因組提純后進行CRISPR體外切割實驗，再捕獲發生脫靶切割的位點即可。1) Digenome-seqDigenome-seq是較早提出的一類細胞外脫靶位點檢測方法，提純的基因組DNA被Cas9/sgRNA切割后，再經過標準的全基因組測序流程獲得測序數據，之后需要較為復雜的生物信息學分析才能夠獲得CRISPR切割位點的信息。總體來講，這種方法測序成本較高，并且檢測靈敏度也有限。2)SITE-seq為了有效檢測到低頻脫靶位點，一般需要在建庫時定向捕獲CRISPR切割位點。SITE-seq就是這樣一種測序方法，提純的基因組DNA經過Cas9/sgRNA切割后，在切割位點末端連接帶Biotin的接頭；再隨機打斷基因組，在另一端連接第二個接頭；經過鏈霉親和素磁珠純化，只有一輪被Cas9切割的DNA才能夠被純化并測序，實現了CRISPR切割位點的富集。該方法雖然提高了脫靶位點的檢測靈敏度，但有著較高的實驗要求，每次需要投入大量的基因組DNA，并且無法區分提純基因組DNA時發生的隨機斷裂和Cas9的切割，導致產出較為明顯的背景信號。同時，由于一輪Biotin接頭只會接在Cas9切割位點的一側，導致測序結果里只能看到脫靶位點一側的序列。江蘇種子基因脫靶檢測方法高深度全基因組重測序服務,該方法能多方位精細地對基因編輯的細胞或個體進行off-target檢測。

降低CRISPR脫靶效應，你可以做什么？CRISPR技術是一種簡單而強大的編輯基因組的工具。它使研究人員能夠輕松地改變DNA序列并修改基因功能。它的許多潛在應用包括糾正遺傳缺陷，zhiliao和預防疾病的傳播，以及改善農作物。在流行的用法中，CRISPR是CRISPR-Cas9的簡寫。CRISPRs是“有規律地間隔的短回文重復序列”的縮寫。它是DNA的一個特殊區域，有兩個明顯的特征：存在核苷酸重復和間隔物。核苷酸的重復序列分布在整個CRISPR區域。間隔物是穿插在這些重復序列中的DNa pian段。

通常不需要進行標準的遺傳毒性組合試驗，但應根據基因zhiliao產品的特點、產品的具體適應癥、載體的已有信息、導入基因序列結構等，評估基因zhiliao產品整合進基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發生情況，并檢測隨后可能發生的異常細胞行為；評估插入突變（插入位點、插入拷貝數等）引起的遺傳毒性風險。當基因zhiliao產品采用基因編輯或轉座子技術時，需要關注脫靶編輯、轉座子轉座印跡引起的遺傳毒性問題；鑒定/表征基因組整合位點。基因編輯技術脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。

基于已有科學經驗和既往非臨床/臨床研究結果，如果認為基因修飾細胞所采用的載體系統可將外源基因整合到細胞基因組中并可在體內長期存續，需綜合分析以上風險因素，評估潛在的插入突變、致瘤/致性風險。非臨床研究，應采用具有代表性的基因轉導細胞進行基因整合位點分析，分析細胞的克隆組成以及在關注基因（如liu相關調控基因）附近有無優先整合跡象，含有關注整合位點的細胞有無優先異常增殖。對于嵌合抗原受體（Chimericantigenreceptor，CAR）或T細胞受體（Tcellreceptor，TCR）修飾的免疫細胞，應盡可能采用多種方法評估其靶點相關毒性和脫靶毒性風險。crispr/cas9脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。江蘇種子基因脫靶檢測方法

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脫落與傳播。對于部分有ganran或復制能力的基因zhiliao產品，從受試者者體內排出或脫落到自然環境后，可能會傳播給受試者的密切接觸者，包括患者親屬和醫護人員等，進而產生病毒傳播或ganran風險。其他考慮因素。除產品相關因素外，基因zhiliao產品的長期風險評估還應考慮靶細胞/組織/qiguan，患者群體（年齡、免疫狀態、死亡風險等）和相關疾病的特征以及合并其他zhiliao的影響。如果基因zhiliao產品可在生殖腺、生殖細胞等組織qiguan中分布并發揮作用，可能對受試者或其配偶的生育能力、妊娠以及胎兒產生難以預測的遲發性影響。江蘇種子基因脫靶檢測方法