要準備的器具：組織剪2把，有齒鑷1把，無齒鑷1把，200 ml燒杯1個，培養皿1個，帶蓋廣口瓶1個，離心管、小瓶數個，滴管若干。以上物品須經嚴格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1％醋酸溶液。經44.48N10 min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75％酒精溶液。取大鼠尾巴，洗凈，置75%酒精浸泡消毒后，手持尾巴，用止血鉗夾住尾巴較高，折斷尾骨后拉出尾腱，將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中，稱尾腱的重量，按每克尾腱50ml 的比例加入0.1%醋酸溶液，搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置48 小時，離心。吸取其上清，分裝至小瓶，4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成。放上小玻片，自然干燥后小玻片就固定于培養瓶之中。杭州珠海鼠尾膠原

具體實施方式實施例1 止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯合發揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為 0.2% 0.2%。余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養小板，-40°C預凍池，再轉入_80°C超低溫冰箱急凍4h，再轉入真空冷凍干燥機中將復合材料在-4°C下冷凍干燥10h，即可以得到復合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌，干燥保存。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血。實施例2 止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯合發揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為5% 2% 1%，余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養板，-20°C預凍，再轉入_80°C超低溫冰箱急凍8h，再轉入真空冷凍干燥機中將復合材料在-4°C下冷凍干燥30h，即可以得到復合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌，干燥保存。南昌鼠尾膠原生產廠家使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。

鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水，采用冷凍干燥工藝制備。本發明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備，較傳統的止血材料不可吸收、容易引起機體過敏、止血效果差等缺點，本發明所制備的止血材料具有人體內可吸收，生物相容性好；止血效果快，具有很強的親水性；同時可啟動血小板的凝聚，一旦血小板凝聚，就可形成血栓，進而促使血漿結塊阻止血流。同時，膠原表面的特定區域可以與細胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結合，可以起到防止腸粘連的功效。

一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結合的工藝，保持恒低溫無菌的環境，利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心，簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進行提純。從提取原料到樣品生成過程中，進行多次真空冷凍干燥，并經進一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產率和生物相容性，降低了成本，適用于生物醫用材料。膠原蛋白是結締組織和內臟部位外基質的主要成分。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理，收集上清液；在冰水浴中，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調節pH = 6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀。按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。無錫鼠尾膠原單價

加到相應的培養器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。杭州珠海鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3．稀釋一定數量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。杭州珠海鼠尾膠原