細胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰毎姆独换瘜W介導方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉(zhuǎn)染技術。理想細胞轉(zhuǎn)染方法，應該具有轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導的轉(zhuǎn)染技術，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是，細菌轉(zhuǎn)染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。到時后，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液。石家莊細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨

轉(zhuǎn)染方式：細胞由帶負電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成，這對大分子物質(zhì)來說是個不可透過的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架，其也帶負電荷。為了使核酸穿過細胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術，大致分為三類：化學方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷。生物方法---利用基因工程細菌轉(zhuǎn)染非細菌基因到細胞中。物理方法---在細胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時的孔從而導入DNA。然而，沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗，理想的方法應根據(jù)您的細胞類型和實驗需要進行選擇，理想的方法應具有高轉(zhuǎn)染效率，低細胞毒性和對正常生理學的影響較小，并且易于使用和可重復性等特點。北京正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑價格代細胞和傳代次數(shù)多的細胞都不是較佳選擇。

細胞轉(zhuǎn)染實驗簡介：實驗材料與器材：1、材料293T細胞、MyoD表達質(zhì)粒和EGFP表達質(zhì)粒、DMEM培養(yǎng)基、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液、轉(zhuǎn)染試劑(TransFast)2、器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸、血球計數(shù)板、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱、臺式離心機、35mm培養(yǎng)皿、轉(zhuǎn)染管、15ml離心管、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法較重要的就是防止其毒性，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例，細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對于效率的提高有巨大的作用。

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗，盡量使用開封半年內(nèi)的，因為過了半年后，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清，會導致細胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候，較好不要換液，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清。過早的話，會引起未轉(zhuǎn)染的細胞瘋狂生長。那么，什么是較佳時機呢？在20%的細胞變圓的時候，就是加血清的較佳時機。轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導幾個名詞是從事生命科學研究的初學者經(jīng)常碰到的。

細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：磷酸鈣共沉淀原理：該法可用于瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結(jié)果容易出現(xiàn)差異，且對許多類型的細胞培養(yǎng)物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性，轉(zhuǎn)染效率較差。實驗步驟：將核酸與氯化鈣在磷酸鹽緩沖液中混合，同時控制好pH、溫度等條件→室溫孵育，生成濃縮DNA的極小不溶性顆粒沉淀→將顆粒型沉淀分散到細胞中，促進DNA粘附在細胞表面→共沉淀通過內(nèi)吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或者選擇穩(wěn)定性傳染。細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素。武漢正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑服務電話

瞬時和穩(wěn)定表達DNA轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)入基因的表達可以在1－4天內(nèi)檢測到。石家莊細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨

如何提高細胞轉(zhuǎn)染實驗效率：優(yōu)化細胞生長狀態(tài)密切觀察您的細胞;確保它們狀態(tài)良好。在開始轉(zhuǎn)染細胞之前，先制定一個適當?shù)姆N板方案，使細胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài)。增加成功幾率—細胞是轉(zhuǎn)染過程中的一個關鍵元素，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量。此外，還常用促有絲分裂刺激物(如，細菌轉(zhuǎn)化，生長因子，條件培養(yǎng)基，以及滋養(yǎng)細胞)來活化原代培養(yǎng)細胞。貼壁細胞相比較懸浮細胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的差異明顯。天生趨于懸浮的細胞(如HL60，Jurkat)非常難以轉(zhuǎn)染。相反，天生為貼壁的細胞(如HEK，CHO)則可適應懸浮生長的條件。石家莊細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨