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糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來(lái)顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過(guò)碘酸(又稱高碘酸)是一種強(qiáng)氧化劑,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,使之變?yōu)槎┎籗chiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時(shí)應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時(shí)間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過(guò)氧化,這是很關(guān)鍵的步驟。PAS技術(shù)是很少可檢測(cè)不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來(lái)催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認(rèn)為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標(biāo)冸唾液的考慮,不主張應(yīng)用唾液在滴加染液時(shí),務(wù)必使染液完全覆蓋組織,但不能溢出圈外,避免浪費(fèi)試劑。福建咨詢糖原染色試劑盒推薦廠家
糖原染色在使用過(guò)程中需要注意以下幾個(gè)方面:盡可能選取小塊新鮮組織及時(shí)固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前決不能用水或生理鹽水等浸洗。應(yīng)避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能較好地保存糖原,但有使糖原流動(dòng)到細(xì)胞一側(cè)的現(xiàn)象,多數(shù)人認(rèn)為是由于固定劑把細(xì)胞內(nèi)的糖原推向固定劑對(duì)組織浸透的方向而造成。其他組織應(yīng)用中性福爾馬林固定為佳。組織在4℃左右溫度內(nèi)固定與保存,是針對(duì)糖的性質(zhì)和避免糖原溶于水而采取的相應(yīng)措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能 白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此較好不單獨(dú)使用乙醇固定,以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳天津正規(guī)糖原染色試劑盒量大從優(yōu)過(guò)碘酸氧化時(shí)間不宜過(guò)久,氧化時(shí)的溫度以18~22℃佳。
含乙二醇基的多糖經(jīng)過(guò)碘酸氧化,產(chǎn)生醛基,與雪夫(Schiff)試劑中無(wú)色品紅結(jié)合,形成紫紅色沉淀物定位于含糖原的胞漿中。該反應(yīng)稱為碘酸-雪夫(PAS)反應(yīng)。(1)雪夫液配制:堿性品紅1g溶于200ml沸水中,冷卻60℃時(shí)過(guò)濾,加1mmol/L鹽酸20ml,再冷卻至25℃左右,加偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,置暗處24h,無(wú)色即可放冰箱中保存,呈微紅色,則加活性炭1~2g,吸附過(guò)濾使成無(wú)色液體,放冰箱中保存。若溶液變紅,即不能再用。(2)10g/L過(guò)碘酸水溶液:過(guò)碘酸(HIO4·2H2O)1g,加蒸餾水至10ml。溶解后蓋緊放冰箱備用,一般可用3個(gè)月,變黃則失效。糖原染色試劑盒。
糖原染色試劑盒。含乙二醇基的多糖經(jīng)過(guò)碘酸氧化,產(chǎn)生醛基,與雪夫(Schiff)試劑中無(wú)色品紅結(jié)合,形成紫紅色沉淀物定位于含糖原的胞漿中。該反應(yīng)稱為碘酸-雪夫(PAS)反應(yīng)。(1)雪夫液配制:堿性品紅1g溶于200ml沸水中,冷卻60℃時(shí)過(guò)濾,加1mmol/L鹽酸20ml,再冷卻至25℃左右,加偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,置暗處24h,無(wú)色即可放冰箱中保存,呈微紅色,則加活性炭1~2g,吸附過(guò)濾使成無(wú)色液體,放冰箱中保存。若溶液變紅,即不能再用。(2)10g/L過(guò)碘酸水溶液:過(guò)碘酸(HIO4·2H2O)1g,加蒸餾水至10ml。溶解后蓋緊放冰箱備用,一般可用3個(gè)月,變黃則失效。幫助鑒別白血病細(xì)胞和腺骨髓轉(zhuǎn)移的腺細(xì)胞,腺細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)。
PAS染色試劑配制及染色方法:1.材料與方1.1 實(shí)驗(yàn)材料新鮮小白鼠肝臟、腎臟標(biāo)本各30例,均來(lái)自我室實(shí)驗(yàn)材料。1.2 主要試劑1.2.1 AAF固定液又稱酒精醋酸福爾馬林混合固定液,其配方:無(wú)水乙醇80mL,冰醋酸5mL、甲醛10mL。1.2.2 Carnoy固定液 氯仿300mL,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3 過(guò)碘酸溶液 0.5g過(guò)碘酸(HIO)溶于100mL蒸餾水或者70%酒精溶液中,或者按如下配方配制:過(guò)碘酸0.8g,95%乙醇70mL,醋酸鈉0.27g,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存。1.2.4 無(wú)色品紅液(Schiff氏液) 在三角燒內(nèi)加入蒸餾水500mL,煮沸后,在保持微沸的情況下,加入堿性品紅2.5g,并不斷搖動(dòng)約5min(勿使之沸騰),使堿性品紅徹底溶解(溶解液為深紅色)。冷卻到50℃時(shí),過(guò)濾,加入1N鹽酸50mL,再待冷卻至25℃時(shí)加入偏重亞硫酸鈉2.5g,塞住瓶口,搖動(dòng)容器以充分混合(此時(shí)顏色明顯變淡),然后避光放置或冰箱內(nèi)24h過(guò)碘酸溶液和蘇木素溶液濃度更低,不宜過(guò)染。浙江提供糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)
利用化學(xué)試劑與細(xì)胞內(nèi)的某些物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)。福建咨詢糖原染色試劑盒推薦廠家
糖原及粘液染色法注意事項(xiàng):1、糖原的固定要及時(shí),而且標(biāo)本要新鮮。2、如用無(wú)水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病,因無(wú)水酒精滲透較慢,而且容易產(chǎn)生極化,(極化是糖原顆粒趨向于細(xì)胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果較佳,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各種試劑必須化學(xué)純,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,器皿必須潔凈而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏試劑,在經(jīng)過(guò)活性碳吸附漂白后不顯無(wú)色,首先應(yīng)考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,使用時(shí)可考慮適當(dāng)?shù)脑黾佑昧俊F浯慰紤]堿性品紅本身,常常雖屬同一生產(chǎn)廠家,但不同批號(hào),其效果就可能不同,應(yīng)特別引起注意~福建咨詢糖原染色試劑盒推薦廠家