鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100ul10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立。北京鼠尾膠原單價

為了能夠從小鼠身上提取足夠的DNA，要從它們身上取下足量的細胞用于實驗。為了盡可能減少對動物的傷害和方便試驗人員的操作，剪下一小段鼠尾是一個不錯的選擇。就讓我們來盤點一下「耗子尾汁」的三種用法↓↓↓鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的「耗子尾汁」。它可以用于監(jiān)測小鼠血液成分的變化，確認小鼠是否患上了糖尿病或者某些能夠改變小鼠的血糖等。比起心臟和眼部取血，實驗用鼠尾尖取血的取血量較小，但取血之后，小鼠還能繼續(xù)下一步建模或者實驗，完全沒有性命之憂。杭州廣州鼠尾膠原利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。

鼠尾膠原膠凝程序：膠原蛋白I按以下步驟使其pH達到堿性時凝膠。1）將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和，把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上，暫放置一邊。2）將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上，厚度可以根據(jù)需要改變，膠原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的蓋玻片。對于直徑100mm的培養(yǎng)皿，每個加入約6mL;對于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL，對于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL。3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。4）在無菌蒸餾水中（35mm培養(yǎng)皿加5mL，60mm培養(yǎng)皿加10mL等）浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水，放置在層流罩中過夜。5）吸出蒸餾水，用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境，利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心，簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進行提純。從提取原料到樣品生成過程中，進行多次真空冷凍干燥，并經(jīng)進一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料。制備鼠尾膠原：將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積，混勻，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。對于生物科研汪們來說，大白鼠、小白鼠們簡直渾身是寶。重慶鼠尾膠原

不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出。北京鼠尾膠原單價

含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。北京鼠尾膠原單價

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