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細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-03-29

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的常用方法:細(xì)菌轉(zhuǎn)染:原理:對于用脂質(zhì)體不能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,可以采用細(xì)菌轉(zhuǎn)染。可用于蛋白質(zhì)過表達(dá)或克制,是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中,可用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞、原代細(xì)胞的穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)步驟:通過基因克隆生成重組細(xì)菌→采用非細(xì)菌法轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞系,擴(kuò)增并分離得到重組細(xì)菌顆粒→純化并滴定細(xì)菌液→轉(zhuǎn)導(dǎo)目的細(xì)胞(含有細(xì)菌特異性的受體)→去除培養(yǎng)物中的細(xì)菌,并加入新鮮培養(yǎng)基→分析細(xì)胞瞬時(shí)基因表達(dá)或沉默情況。轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染是將外源遺傳物質(zhì)導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程,是細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的重要工具。細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法:轉(zhuǎn)染,是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例;化學(xué)介導(dǎo)方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法,有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性,在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。徐州石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng):物品(PS)物品,比如青霉素和鏈霉素,是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細(xì)胞無毒,但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性,使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以,在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品,甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品。這樣,在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細(xì)胞。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,為了保證無血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長,使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量~

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清:不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的。較好是在靠前次實(shí)驗(yàn)前做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn),比如:HeLa,293,CHO,COS7,MCF-7,HepG2等細(xì)胞,是否加血清,對不同的細(xì)胞是有不同的影響的,有些細(xì)胞是可以有血清的,有些加血清就會(huì)受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時(shí)左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,其一因?yàn)槠胀ㄞD(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡。轉(zhuǎn)染時(shí)不加血清是防止血清的干擾作用,轉(zhuǎn)染后可適時(shí)加入。加入過早會(huì)引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢生長,過晚會(huì)引起較多細(xì)胞死亡。可實(shí)時(shí)觀察1/5細(xì)胞變圓的時(shí)候加入血清。對于原代細(xì)胞,可用促有絲分裂刺激物進(jìn)行細(xì)胞活化。

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染簡介:轉(zhuǎn)染,是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例;化學(xué)介導(dǎo)方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法,有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。大部分細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個(gè)小時(shí)內(nèi)保持健康。長沙正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑平均價(jià)格

這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng):細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。一般轉(zhuǎn)染時(shí),貼壁細(xì)胞密度為70%-90%,懸浮細(xì)胞密度為2×106-4×106細(xì)胞/ml時(shí)效果較好。確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。因?yàn)檗D(zhuǎn)染效率對細(xì)胞密度很敏感,所以在不同實(shí)驗(yàn)間保持一個(gè)基本的傳代步驟很重要。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。在三種不同密度進(jìn)行細(xì)胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的,CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了。這些結(jié)果說明,對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會(huì)因細(xì)胞密度而異細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格

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