外泌體的提取分離:1、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質,利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多。鄭州正規外泌體提取試劑單價
外泌體相關蛋白質與肺病的診斷:近年來,高通量質譜分析被普遍地應用于篩選NSCLC外泌體蛋白的研究,這為我們揭示了更多具有生物標志物價值的分子。Birgitte等采用微陣列芯片技術研究了431例肺病患者和150例對照者血漿外泌體中的蛋白表達情況,發現CD151、CD171和TSPAN8這三種蛋白表達不光能區分一些病癥與正常組織,同時也能區分各種肺病的組織亞型。此外,聯合應用這三種蛋白診斷NSCLC的AUC達到0.74。Clark等采用納升液聯用技術(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了來自正常支氣管上皮細胞系和兩個攜帶NSCLC細胞系的外泌體的蛋白表達譜,從中篩選出如細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子、溶酶體膜糖蛋白2等多種存在顯著性差異表達的蛋白,同時檢測分析這些蛋白有助于提高NSCLC診斷的敏感性和特異性。由于國內有關外泌體提取試劑的缺乏,我國對外泌體的研究還基本依賴于過程繁瑣的超速離心和進口提取試劑盒。貴陽外泌體提取試劑進貨價外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。
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外泌體(Exosome)是細胞主動分泌的囊泡樣小體,大小均一,直徑30-200nm,密度1.10-1.18g/ml,來源普遍,幾乎所有細胞都可分泌,在血液,尿液,唾液,腦脊液,腹水,乳汁等體液中普遍分布。外泌體較早在1986年發現于培養的綿羊紅細胞上清液中。1996年,研究者發現外泌體作為抗原呈遞因子參與T細胞依賴的抗一些病癥反應,開啟了外泌體蛋白研究的新天地。2013年諾貝爾生物/醫學獎解答了細胞如何組織其內部較重要的運輸系統之一——囊泡傳輸系統的奧秘。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受?歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定,純度也受到質疑。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層。
外泌體作為近幾年來的研究熱點,受到了科研工作者的青睞及追捧。由于外泌體內攜帶有大量的miRNA,少量lncRNA,Mrna以及DNA蛋白質成為液體活檢的潛力無限的研究對相。所以,獲得純度高、內容物完整的外泌體非常之重要,那么,外泌體的提取方法也顯得尤為重要。一、差速離心法差速離心法可以說是傳統普遍的外泌體提取方法。原理是:首先低速離心以除去細胞和細胞凋亡碎片;隨后,高速離心以去除大囊泡;高速離心以沉淀外泌體。蘇州君欣生物科技有限公司磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點。成都正規外泌體提取試劑廠家
外泌體的提取方法:密度梯度離心。鄭州正規外泌體提取試劑單價
外泌體的提取、分離方法:開發高效、快速、穩定,并且保持外泌體結構和生物功能完整性的方法,是目前外泌體應用于臨床的基礎和前提。從細胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多,但是外泌體的純度和產量卻和分離方法息息相關。通常分離步驟少、產率高,但是純度會受到影響。鑒于每種分離方法都有其優缺點,實驗可以根據樣本來源、下游實驗目的等,選擇合適的外泌體分離方法。2015年,國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產量都難滿足實驗的需求。因此,推薦聯合使用各種方法,從而得到高純度和高產量的外泌體。鄭州正規外泌體提取試劑單價