細胞轉染那些事兒：1. 選擇傳代次數較低并處于對數生長期的細胞進行轉染。對大多數細胞而言，均需要在轉染當天或前現在鋪板，第二天上午進行轉染，48h后收集細胞進行功能檢測。對于原代細胞，可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。2.對于貼壁細胞，一般要求在轉染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液，重新接種于培養皿或瓶，較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。3.支原體污染會嚴重降低細胞轉染的效率，且支原體不會像細菌污染那么明顯，因而轉染前可用環丙沙星處理細胞以除去支原體。4.細胞轉染時需要一定的細胞密度，以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜。在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。上海正規細胞高效轉染試劑哪家好

如何提高細胞轉染效率：1.組織培養試劑優化細胞生長條件。只使用新鮮配制的培養基和添加劑，并經可能減少所用試劑的變更?；A培養基—目前所使用的各種市售培養基(如，RPMI 1640和DMEM)。培養基的成分包括營養物質(氨基酸，葡萄糖)，維生素，無機鹽，和緩沖物質。有些成分非常不穩定，因此如果不在使用時新鮮加入就可能會產生問題。務必要使培養基避光保存。因為已知有一些組分和緩沖物質，如HEPES，當暴露于光照下就會分解產生細胞毒性物質。另外，血清，添加劑，來自于培養箱內的污染物、化學物質，或/細胞的污染也都可能影響到細胞生理。2.細胞生長狀態密切觀察您的細胞;確保它們狀態良好。在開始轉染細胞之前，先制定一個適當的種板方案，使細胞密度從轉染開始到結束都保持較佳狀態。增加成功幾率—細胞是轉染過程中的一個關鍵元素，它可以是影響結果的一致性和質量的較重要的變量。正規細胞高效轉染試劑廠家脂質體轉染適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中。

細胞轉染實驗注意事項：1.如為貼壁生長細胞，一般要求在轉染前一日，必須應用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養皿或瓶，轉染當日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜，較好在轉染前4h換一次新鮮培養液。2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質，無RNA和其他化學物質的污染，OD260/280比值應在1.8以上。3.培養基中的血清在開始準備DNA和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養基，因為血清會影響復合物的形成。其實，只要在DNA-陽離子脂質體復合物形成時不含血清，在轉染過程中是可以使用血清的。

細胞轉染的注意事項：血清A、DNA-陽離子脂質體復合物形成時不能含血清，因為血清會影響復合物的形成。B、一般細胞對無血清培養可以耐受幾個小時沒問題，轉染用的培養液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認為會降低轉染效率，轉染培養基中加入血清需要對條件進行優化。C、對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用營養豐富的無血清培養基，或者在轉染培養基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用**轉染試劑。有條件的話，可以用無血清培養基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細胞而是轉動培養板讓液體滾動在細胞表面。如果洗的太厲害，細胞又損失一部分，加了脂質體后，細胞受影響就更大了，死亡細胞會增多。能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內。

細胞轉染的常用方法：人工脂質體法 原理：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，進而可被細胞內吞穩定轉染/瞬時性轉染。這種方法幾乎適用于所有細胞，轉染效率高、重復型好，但轉染時需要去除血清，轉染效果隨細胞類型變化大。實驗步驟：在單獨試管中分別稀釋核酸及轉染試劑 → 脂質體與核酸的磷酸骨架結合，形成復合物 → 脂質體上的正電荷有助于復合物與細胞膜結合 → 復合物通過內吞作用進入胞漿 → 分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。操作簡便，對細胞毒性小，轉染效率高受到研究者們的青睞。青島細胞高效轉染試劑直銷價

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細胞轉染操作方法：轉染 ，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，細菌轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。上海正規細胞高效轉染試劑哪家好

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