無血清細胞凍存液的操作規范：1、培養細胞至對數生長晚期，顯微鏡觀察其外觀、形態、有無污染等。選擇狀態良好的細胞進行凍存操作(注：貼壁生長細胞，用胰蛋白酶消化并用完全培養基終止消化，進行細胞計數;懸浮生長細胞，進行細胞計數)。2、500～1000g離心5min，棄上清。3、加入適量的細胞凍存液，重懸細胞，使細胞濃度達到1～10×106/ml，置于凍存管中密閉。4、采取逐級降溫保存：4℃放置20min，-20℃放置30min，-70℃過夜，置于液氮罐中長期存儲。注意：務必超凈工作臺內無菌操作，避免污染。雜交瘤細胞凍存時應定期復蘇，以檢查細胞的活性和分泌抗體的穩定性。無血清細胞凍存液產品性能：既適用于一般培養細胞的凍存，也適用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞的凍存。武漢正規無血清細胞凍存液服務電話

產品特性：a.可直接放置于-80℃冰箱，無需降溫，節省時間和精力；b.即用型，無需現配，操作方便，可減少實驗中因操作引起的污染；c.在多種哺乳細胞系中經過性能驗證，其復蘇率和活率達90%以上；d.可長期存儲于-80℃冰箱(5年以上)，取用方便；e.采用成分明確的無血清配方，價格比常規自配細胞凍存液更為低廉；保存溫度：2~8℃具體操作步驟：1、培養皿或培養瓶中細胞按常規方法消化，或分離獲得原代細胞后，收集于離心管中。2、使用離心機離心，去除上清，收集細胞沉淀。3、根據細胞生長密度加入適量的細胞凍存液進行重懸，充分混勻(推薦凍存密度為1-2×106/ml)。4、將細胞懸液分裝至凍存管中，直接放置于-80℃冰箱保存。24小時后可移入液氮長期保存(可選)。南京石家莊無血清細胞凍存液細胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。

細胞凍存，我們應該注意哪些事項：1、凍存細胞是為了留種，所以要選擇高濃度的細胞量進行凍存。正常情況下，當細胞濃度達到1*105/ml時即可凍存，具體是多少量主要根據個人觀察。2、二甲基亞砜（DMSO)因為穿透細胞的能力較強，因此作為常用的凍存劑，也可以叫做細胞保護劑加入到細胞懸液中。網上有些分享說道，如果選用DMSO，整個細胞懸液的制作過程都要在4℃環境下進行。本人采用過這種方法凍存過A549和某一原代細胞，發現A549復蘇存活率和正常凍存的過程相比并沒有明顯區別，而原代細胞的接種率確實有所上升，可能是因為是A549細胞比較皮實，這種方法更適用于比較脆弱的細胞吧。

無血清細胞凍存液：細胞凍存及復蘇是細胞培養技術中的重要技術，細胞凍存是細胞長期保存的重要手段。細胞凍存液，作為細胞凍存時必須使用的一種溶液，其作用是將需要凍存的細胞懸浮于凍存液，供給細胞生命代謝所必須的營養物質，同時可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。在現有技術中，一般使用培養基、血清和二甲亞砜(DMSO)按照一定比例混合的方法來凍存細胞，DMSO用量為10％，過低的DMSO濃度會導致凍存效果欠佳，但高濃度的DMSO有較大毒性，會對細胞體造成傷害；且傳統凍存液配方中所使用的血清成本高，增加動物病原污染的可能性。此外，有研究表明長期與胎牛血清接觸的細胞會對溶液介質中的胎牛血清發生內吞，內吞胎牛血清后的間充質干細胞有可能發生某些蛋白表達的變化，應用于人體后可發生異種動物蛋白引起的免疫反應，不能直接用于臨床輸注。因此，利用含有血清的凍存液凍存的細胞會給臨床使用帶來一定的風險。無血清細胞凍存液，含多種保護劑成分。

無血清細胞凍存液，通用于人和各種動物細胞株。特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全。既適用于一般培養細胞的凍存，也適用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞的凍存。產品特色：不含動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產品之間有更高的產品質量一致性。成分明確，無批次差異。可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經過費時的程序降溫過程（省時、省力、省錢）。獨特配方有效提高細胞凍存存活率及復蘇率。即用型，無需現配，即開即用。通用型，適用于凍存各種細胞系，原代細胞。可微量，原位凍存，例如雜交瘤細胞的凍存，省時高效。存儲條件：儲存于4℃以下,質量保障期從產品的生產日期起，為期兩年。3個月以上沒有使用凍存液計劃時，盡可能-20℃冷凍保存。為避免重復凍融過程可能導致的凍存液品質下降和性能降低，推薦將產品分裝成小管后，再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。血清批次、品質間差異導致凍存液的批次間差異。金華珠海無血清細胞凍存液

快速凍存即不需要經過梯度降溫，直接將細胞放入-80 ℃冰箱24h。武漢正規無血清細胞凍存液服務電話

新常態下細胞凍存指南：細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍速融，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。典型的細胞凍存液是在生長培養基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清，或只是在血清中加入10%的DMSO。目前在有些實驗室中仍然采用這種自制自配的凍存液，優點是成本低，適合自己的細胞。武漢正規無血清細胞凍存液服務電話