一種海貍鼠尾膠原手術縫合線制備方法,其特征在于,步驟如下:(1)膠原紡絲液的配制:將備用的海貍鼠尾筋切成薄片,用無花果蛋白酶進行酶解處理,再用雙氧水溶液殺酶;將殺酶后的切片用蒸餾水沖洗,然后用乙酸溶液溶脹,把溶脹后的切片分散攪拌,然后用濾網過濾,除去雜質及不溶脹物,然后把該溶液離心脫泡制得膠原紡絲溶液;(2)手術縫合線纖維的成形:將膠原紡絲液裝入立式向上濕法紡絲機的紡絲液貯罐中,用氮氣擠壓入含有pH=8-11、質量濃度為50-80%的硫酸鈉溶液的立式凝固浴中凝固成型,再經過質量濃度為60-90%的乙醇水溶液的脫水浴脫水,再經過假捻器加捻,合股后再進入含有pH=9-11、質量濃度為0.8-1.2%戊二醛的交聯浴中交聯,經過水浴水洗,再經第二次加捻,除去水及交聯劑,干燥后,在卷繞輥上卷繞即得手術縫合線。鼠尾膠原醋酸溶解:不要晃動或攪拌。杭州鼠尾膠原價格
實驗應用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統的研究提供科學有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養法培養人鼻腔纖毛上皮細胞,培養7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態和結構,應用高速攝像技術測量纖毛擺動頻率.結果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式的成功建立,為今后研究鼻內用藥對纖毛清理功能的影響提供了良好的方法和途徑。南京北京鼠尾膠原膠原蛋白(Collagen)是結締組織和內臟部位外基質的主要成分。
一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,調節pH=6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時,去除上清液,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀;2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液,冰水浴中,調節PH=6.5;溶液依次通過陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂進行脫鹽處理;(8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液,-40至-20°C預凍2?4小時,然后真空冷凍干燥,凍干產品經進一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,滅菌、包裝,得到成品膠原蛋白粉末。
以鼠尾膠原為支架的類似物的建立:探尋建立類似物的培養方法。方法:原代培養人皮膚成纖維細胞,制備鼠尾膠原,將鼠尾膠原溶液、濃縮培養基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細胞溶液在適當的比例下混合后形成凝膠構建類似物。結果:形成的類似物中成纖維細胞生長狀態良好,并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結論:①利用鼠尾膠原可以構建類似物,該模型是進行皮膚部位型培養和制作復合皮的關鍵與基礎;②成纖維細胞膠原凝膠復合物有著良好的生物學特性,它是研究成纖維細胞與細胞外基質之間以及細胞之間相互作用的良好模型。鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠。
鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察:果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色;礦化2d后,膠體的顏色逐漸加深至乳白色;礦化6d后,隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內部,膠體顏色加深至純白色,并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體,予鑷子夾起,其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落。TEM表征顯示:礦化2d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結構逐漸模糊,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內部,膠原纖維部分礦化,沿著膠原纖維生長,忖度變深;礦化6d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結構完全消失,膠原纖維內部可以看到黑色羥基磷灰石晶體,嵌入膠原纖維縱向生長。當鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時,由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據,膠原纖維呈現黑色,選區衍射斑圖符合羥基磷灰石表征。結果無鼠尾膠原時,前庭毛細胞懸浮于外液,不宜封接。濟南正規鼠尾膠原廠家推薦
自制的鼠尾膠原能正常地培養出大鼠耳蝸邊緣細胞,細胞角蛋白18表達陽性。杭州鼠尾膠原價格
鼠尾膠原:鼠尾膠原是一種天然培養基和一種天然的黏附劑。實驗設備及材料:大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。實驗內容:1、制備鼠尾膠原(兩個同學一組操作)。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養瓶內。制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘;2、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的,折斷尾骨后拉出尾腱;3、將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡;4、重復步驟2、3,直至尾腱量夠用;5、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克);6、將尾腱置于平皿內剪碎,轉移至三角燒瓶中;7、按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液;8、搖晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期;9、離心,4000轉/分,10-15分鐘;10、吸取上清,分裝成小瓶,4℃保存。杭州鼠尾膠原價格