外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷：近年來眾多文獻報道，肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進肺病的發(fā)生的發(fā)展，是早期診斷肺病的有效途徑。有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%，因而認(rèn)為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標(biāo)志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì)，進一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導(dǎo)途徑以促進一些病癥的發(fā)生的發(fā)展，因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標(biāo)記物。近幾年來，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒。來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。無錫外泌體提取試劑廠家

外泌體的提取方法，先用含無外泌體血清的培養(yǎng)基對人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞進行饑餓培養(yǎng)，這樣可使干細(xì)胞處于正常生長狀態(tài)，不會被克制生長增殖，其所分泌的外泌體所包含的有效物質(zhì)也更貼近其自然狀態(tài)下的外泌體，然后將含有外泌體的培養(yǎng)上清液進行低速差速離心(即先一離心處理、再第二離心處理)以去除細(xì)胞及其碎片，用100kd超濾管對低速差速離心后的離心液進行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液，將超濾液經(jīng)過第三離心處理去除雜質(zhì)后直接用0.22μm過濾器過濾除菌，過濾掉粒徑為220nm以上的物質(zhì)，進一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液，因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮，這樣過濾除菌效率得到較大提高，較后將濃縮液進行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體。濟南正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話外泌體提取：差速離心。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術(shù)之一。

1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會分泌抗原呈遞外泌體（antigenpresentingvesicle），所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗一些病癥反應(yīng)。2007年HValadi等進一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多，研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中。目前的主流觀點認(rèn)為，外泌體的產(chǎn)生過程為：細(xì)胞膜內(nèi)陷，形成內(nèi)體（endosome），再形成多泡體（multivesicularbodies，MVB），較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體較早見于1981年，EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，并命名為exosome。對于外泌體的作用，當(dāng)時推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。

作為一種分子通斷開關(guān)的KRAS發(fā)生突變時會處于“開啟”狀態(tài)。在80%～95%的胰腺導(dǎo)管腺病（PDAC）當(dāng)中，這個基因發(fā)生突變，這也是這種一些疾病中較為常見的突變。這些研究人員證實iExosome能夠運送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子，并且比他們的合成對應(yīng)物脂質(zhì)體（liposome）更加高效。脂質(zhì)體不具有外泌體表現(xiàn)出的天然復(fù)雜性和優(yōu)勢。德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)助理教授ValerieLeBleu博士說，“我們的研究提示著與脂質(zhì)體相比，外泌體表現(xiàn)出運送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長的優(yōu)異能力。我們也證實外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環(huán)單核細(xì)胞的吞噬作用。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。

外泌體（exosome），特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。現(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細(xì)胞有：肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、瘤細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。同時，不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。濟南正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話

也可以作為治病手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。無錫外泌體提取試劑廠家

外泌體在肺病治病中的作用：有研究發(fā)現(xiàn)，使用外泌體運載紫杉醇（PTX）可顯著提高病細(xì)胞對PTX的吸收，將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細(xì)胞毒性，Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展。Aqil等在進行裸鼠實驗時發(fā)現(xiàn)，加載至外泌體中的雷公藤紅素（Exo-CEL）比普通的CEL有更強的抗一些病癥功效，且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性，由此可以證明，外泌體制劑可以有效增強CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性。到目前為止，外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制，有效的外泌體藥物遞送平臺的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在治病靶點的探索。已有的研究表明外泌體在肺病治病領(lǐng)域有著廣闊的前景，期待外泌體在肺病治病領(lǐng)域早日得到突破，造福更多的患者。無錫外泌體提取試劑廠家