鼠尾膠原制備詳細步驟： 1、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡 5 分鐘； 2.將尾巴剪開、去掉皮毛，并剪成小段，抽出銀色的尾鍵 3、將尾腱剪斷置于平皿中，PBS 浸泡； 4、將所有的尾鍵放于 Tris-HCl 中，4 度過夜。 0.05mol/L Tris-bas 的 Tris-HCl 的配制方法。 稱量 6gTris 置于 1L 燒杯中，加入約 800ml 去離子水，充分攪拌溶解，濃鹽酸調節 PH，高壓滅菌。 5、吸去 Tris-HCl，將尾腱稱重（0.5-1 克）； 6、將尾腱置于平皿內剪碎，轉移至三角燒瓶中； 7、按每克尾腱 50ml 的比例，加入 0.1%醋酸溶液； 8、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期； 9、離心，4 度 4000 轉/分，30 分鐘； 10、吸取上清，過 300 目濾器。 11、每 600ml 上述粗提液中加入 100ml 0.14 mol/LNaOH，8000 轉 5min 離心，棄上清，留絮狀沉淀。 12、將絮狀沉淀物置于三蒸水中，用 0.1mol/L（1000:6）醋酸溶解沉淀物。制備鼠尾膠原：將尾腱置于平皿內剪碎，轉移至三角燒瓶中。昆明正規鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原的提取步驟：配置含4.5mmol/lNacl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-Hcl溶液（用鹽酸將其PH值調至7.5） 取鼠尾，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱，置于生理鹽水中，稱重，再倒掉生理鹽水，酒精中浸泡20分鐘 離心膠原溶液，（1200rpm10min) 取上清 每600上述粗提液加100ml0.14mol/l NaOH溶液離心，（8000rpm 5min) 其上清，留絮狀沉 10.將絮狀沉淀物置于三蒸水中，用0.1mol/l(1000:6) 醋酸溶解絮狀沉淀物，加入消毒過的攪拌 子，冷房攪拌數天，得絮狀膠原。 注意所有和膠原有關的操作都在冰上進行\ Rat tail collagen type 配置含4.5mmol/L NaCl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-HCl 溶液（用鹽酸將其pH值調至7.5）； 于-20冰箱中取出鼠尾，浸泡75%或70%酒精，解凍； 在一小培養皿中放置少量生理鹽水，置于電子秤上，調零； 取鼠尾，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱，置于生理鹽水中。金華鼠尾膠原廠家膠原蛋白按其應用可以分為食品級、一般級、醫藥級。

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3．稀釋一定數量的膠原溶液。 4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。

含細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準備好懸浮于培養液的細胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養液，混勻后立即加到培養器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養液，轉移到培養箱中培養。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。制備鼠尾膠原：重復步驟2、3，直至尾腱量夠用。

鼠尾膠原蛋白等實驗技術應用：干細胞、血管內皮細胞等多種「難伺候」的細胞，以及一些組織在體外培養時，需要在模擬體內環境的細胞外基質中生長，膠原蛋白和纖粘蛋白正是細胞外基質的主要組成部分，富含 1 型膠原蛋白大鼠尾部也成了實驗室用膠原蛋白的較主要來源。鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的。它可以用于監測小鼠血液成分的變化，確認小鼠是否患上了 糖尿病或者某些治好能夠改變小鼠的血糖等。比起心臟和眼部取血，實驗用鼠尾尖取血的取血量較小，但取血之后，小鼠還能繼續下一步建模或者實驗，完全沒有性命之憂。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。石家莊正規鼠尾膠原產品介紹

酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結構。昆明正規鼠尾膠原廠家

膠原蛋白（Collagen）是結締組織和內臟部位外基質的主要成分，但在皮膚、肌腱、骨骼中分布*為普遍。膠原蛋白在結構和遺傳學上被分為不同類型，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結構上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結構，被普遍用于多種細胞的培養基質，如肝細胞、纖維細胞、脊髓神經節、雪旺氏細胞等。另外，I型膠原蛋白在細胞生長、分化、遷移和組織態的發生等方面也具有重要應用。注意事項：1） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。2） 整個操作請于冰上進行，因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠。3） 整個操作請在無菌環境下無菌操作，避免污染以影響細胞生長。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。昆明正規鼠尾膠原廠家

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