培養基配制方法:正確制備培養基是微生物檢驗的較基礎步驟之一,使用脫水培養基和其他成分,尤其是含有有毒物質(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應遵守良好實驗室規范和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確制備會導致培養基出現質量問題。使用商品化脫水合成培養基制備培養基時,應嚴格按照廠商提供的使用說明配制。如重量(體積)、pH、制備日期、滅菌條件和操作步驟等。實驗室使用各種基礎成分制備培養基時,應按照配方準確配制,并記錄相關信息,如:培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、制造商、批號、pH、培養基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便溯源。培養基根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基。北京不銹鋼內桶培養基制備儀
培養基的分類:培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒,以利于培養基的徹底滅菌。每批培養基應另外分裝20ml培養基于一小玻璃瓶中,隨該批培養基同時滅菌,以為測定該批培養基較終pH之用。陜西培養基制備儀液體培養基在靜止的條件下,在菌體或培養細胞的周圍,形成透過養分的壁障,養分的攝入受到阻礙。
培養基滅菌方法有哪五種類型:1、輻射滅菌原理方法:輻射滅菌原理:是用高能電磁輻射和細菌核酸的光化學反應引起細菌死亡。常用的是紫外線,X射線和伽馬射線。主要用于室內空氣和器皿的表面消毒。2、干熱滅菌原理方法:干熱滅菌原理:是采用高溫氧化微生物,使蛋白質變性并濃縮電解質以殺死微生物。3、化藥滅菌原理方法,化藥滅菌原理:使用化藥與微生物細胞中的成分發生反應,從而使蛋白質變性酶失活。4、過濾滅菌原理方法:過濾滅菌原理:是使用不能滲透的微生物濾膜進行滅菌。使用方法是使用0.01-0.45毫米的細孔濾膜對壓縮空氣,酶溶液和其他對熱不穩定的復合溶液進行滅菌。5、濕熱滅菌原理方法:在工業生產中,用于滅菌對于培養基,管道和設備,通常將蒸汽加熱到一定溫度并保持一段時間,這稱為濕熱滅菌。濕熱滅菌原理:是直接用蒸汽進行滅菌。蒸汽冷凝后會釋放出大量潛熱。蒸汽具有強大的穿透力,破壞細菌蛋白質和核酸的化學鍵,使酶失活并殺死由于代謝紊亂引起的微生物。
培養基的類別按照培養基的物理狀態分:培養基按其物理狀態可分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基三類。(1)古體培養基。是在培養基中加入凝固劑,有瓊脂、明膠、硅膠等。古體培養基常月于微生物分離、鑒定、計數和菌種保存等方面。(2)液體培養基。液體培養基中不加任何凝固劑。這種培養基的成分均勻,微生物能充按標準中規定的培養時間和溫度對接種后的平板進行培養,目標菌應呈現良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態,非目標菌應是微弱生長或無生長。液體培養基具有進行通氣培養、振蕩培養的優點。
固體斜面培養基配制:培養基的過濾澄清,液體培養基必須一定澄清,瓊脂培養基也應透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法,濾紙應折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養基放入大的三角燒瓶內,裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000ml培養基加入1~2個雞蛋的蛋白,強力振搖3~5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。培養基的分裝,培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。脫水培養基,又稱預制干燥培養基,指含有除水分外的一切成分的商品培養基。江蘇瓊脂滅菌 培養基制備儀
在配制培養基時應盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養基成分。北京不銹鋼內桶培養基制備儀
培養基的性能測試:1.外觀控制:制備好的培養基應有相應的顏色,一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化,是否蒸發/脫水。2.污染控制:從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。3.性能測試:(1)測試菌株選擇:測試菌株是具有其表示種的穩定特性并能有效證明實驗室特定培養基較佳性能的一套菌株。(3)半定量測試方法(改進的劃線法接種法)。(4)定性測試方法(平板接種觀察法)。用接種環取測試菌培養物,在測試培養基表面劃平行直線。北京不銹鋼內桶培養基制備儀
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