結(jié)合國內(nèi)外小鼠原代肝細胞分離培養(yǎng)的方法并加以改良,成功獲得了產(chǎn)量高、活率高、純度高的原代肝細胞,在此基礎(chǔ)上采用不同濃度的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)誘導(dǎo)貼壁的原代肝細胞,成功構(gòu)建了肝脂肪變性細胞模型,并且能夠很好地模擬體內(nèi)肝實質(zhì)細胞脂質(zhì)累積的現(xiàn)象。由于肝脂肪變性細胞模型還存在一定的局限性,如不能充分模擬肝臟局部微環(huán)境對NAFLD發(fā)病過程的影響,因此還需將細胞模型與動物模型相互聯(lián)系起來,使兩種模型相互補充,取長補短,為進一步研究NAFLD的發(fā)病機制及藥物治療奠定基礎(chǔ)。原代肝細胞的用途?歡迎致電上海中喬新舟!廣東哥廷根小型豬原代肝細胞系
隨著人們飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的改變,脂肪肝的發(fā)病率也呈逐年升高趨勢。臨床上根據(jù)飲酒與否,將其分為非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease,NAFLD)和酒精性脂肪性肝病(alcoholicfattyliverdisease,AFLD)2種類型。NAFLD是指除酒精和其他已知致肝損傷因素外,以胰島素抵抗和肝細胞脂肪變性為主要特征的臨床病理綜合征。NAFLD涵蓋從單純性脂肪變性/非酒精性脂肪肝到非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化和肝細胞的過程[1-3]。據(jù)有關(guān)資料顯示,NAFLD在全世界范圍內(nèi)患病率是25%左右[4],在亞洲地區(qū)的發(fā)病率甚至高達[5],且呈逐年上升趨勢。在中國,NAFLD患病人數(shù)增長迅速且呈低齡化發(fā)病趨勢,發(fā)病率約為,已成為只次于慢性病毒性肝炎的第二大肝病[6-7],嚴重威脅人類健康。 江西人體原代肝細胞一般多少錢選擇原代肝細胞應(yīng)該注意什么?上海中喬新舟告訴您。
細胞培養(yǎng)方法:1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
原代肝細胞體外培養(yǎng)48h后,參照文獻[20-21]報道的方法誘導(dǎo)脂肪變性細胞模型。設(shè)置不同濃度(0~)的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1),F(xiàn)FA混合物與含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基充分混勻后按濃度順序依次加入六孔板中,置于37℃、含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),24h后油紅O染色,觀察細胞內(nèi)脂滴沉積情況,并采用全自動生化分析儀檢測肝細胞內(nèi)TG含量。油紅O染色步驟:棄去六孔板中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液清洗1~2次,加入油紅O固定液固定20~30min;棄去固定液,加入新鮮配制的油紅O染液染色10~20min;60%的異丙醇浸洗1~2min,三蒸水清洗2~3次直至無多余染液;加入蘇木素染液染色1~2min,油紅OBuffer清洗1min,晾干,倒置顯微鏡下觀察。細胞內(nèi)TG測定步驟:棄去六孔板中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液清洗1次,按每孔細胞數(shù)量加入150~250μL的RIPA裂解液,刮刀刮取細胞,冰上裂解30min,4℃,13000r/min,離心10min,取上清,全自動生化分析儀檢測肝細胞內(nèi)TG含量。 原代肝細胞如何選擇?上海中喬新舟告訴您。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!
肝臟是人體“的”代謝,與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān)。肝細胞在肝臟參與的各種代謝過程中發(fā)揮了主要作用。肝細胞是實質(zhì)細胞,在肝臟中的比例多;此外實質(zhì)細胞還包括少量的膽管內(nèi)皮細胞。而非實質(zhì)細胞則包括星狀細胞,巨噬細胞,NK細胞,成纖維細胞等,只占整個肝臟細胞的20%左右。原代肝細胞的優(yōu)點:①原代肝細胞由于離體時間短,因此其能夠保持在體內(nèi)的生物學(xué)特性,是更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。②原代肝細胞能夠避免體內(nèi)實驗時肝臟其他細胞對肝細胞的影響,從而得出更加準確的研究結(jié)果。③原代細胞相比體內(nèi)實驗具有更好的可控性。 上海中喬新舟告訴您 原代肝細胞的選擇方法。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!海南雞胚原代肝細胞特點
原代肝細胞有哪些種類?上海中喬新舟告訴您。廣東哥廷根小型豬原代肝細胞系
在政策促進下,未來3—5年內(nèi),我國將在醫(yī)藥健康短缺地區(qū)建設(shè)一批高水平臨床醫(yī)治中心、高層次的人才 培養(yǎng)基地和高水平的科研創(chuàng)新與轉(zhuǎn)化平臺,培育一批品牌優(yōu)勢明顯、跨區(qū)域提供高水平服務(wù)的集團。從目前 ? 中喬新舟產(chǎn)品線比較豐富:現(xiàn)有美國Sciencell(原代細胞及配套完全培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)試劑、檢測試劑盒、生長因子等)、新一代無血清培養(yǎng)基、年產(chǎn)1000萬毫升內(nèi)蒙古合作牛血清生產(chǎn)基地等。 ? ? ?? 特色產(chǎn)品:原代細胞、細胞株(逾1000多種細胞系且人源細胞均實現(xiàn)STR鑒定)、ELISA試劑盒、澳洲美洲血清、國產(chǎn)血清、各種培養(yǎng)基。 ? 儀器設(shè)備:激光片層掃描顯微鏡(活細胞高速熒光顯微成像完美處理方案)、3D細胞大規(guī)模擴增系統(tǒng) 。 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 特色服務(wù):細胞熒光標記、細胞的干擾及過表達、原代細胞永生化、細胞基因敲除、轉(zhuǎn)基因白鼠、動物模型、活細胞成像/免疫熒光染色/激光共聚焦拍照服務(wù)等。 的公開數(shù)據(jù)看,原材料成本、研發(fā)成本、生產(chǎn)成本等占醫(yī)藥整體成本相對較低,占據(jù)高比例的是運營成本、商務(wù)成本、資本成本等。預(yù)計隨著“4+7”試點擴大、后續(xù)品種的增加,制藥工業(yè)的營銷費用將會面臨巨大的下跌。加之 ? 中喬新舟產(chǎn)品線比較豐富:現(xiàn)有美國Sciencell(原代細胞及配套完全培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)試劑、檢測試劑盒、生長因子等)、新一代無血清培養(yǎng)基、年產(chǎn)1000萬毫升內(nèi)蒙古合作牛血清生產(chǎn)基地等。 ? ? ?? 特色產(chǎn)品:原代細胞、細胞株(逾1000多種細胞系且人源細胞均實現(xiàn)STR鑒定)、ELISA試劑盒、澳洲美洲血清、國產(chǎn)血清、各種培養(yǎng)基。 ? 儀器設(shè)備:激光片層掃描顯微鏡(活細胞高速熒光顯微成像完美處理方案)、3D細胞大規(guī)模擴增系統(tǒng) 。 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 特色服務(wù):細胞熒光標記、細胞的干擾及過表達、原代細胞永生化、細胞基因敲除、轉(zhuǎn)基因白鼠、動物模型、活細胞成像/免疫熒光染色/激光共聚焦拍照服務(wù)等。 “兩票制”壓縮流通渠道層級,減少中間環(huán)節(jié)層層加價;反商業(yè)賄賂、稅務(wù)改進等一系列政策的落地,迫使產(chǎn)業(yè)從不規(guī)范、低水平的商業(yè)化向規(guī)范的、高水平成熟的商業(yè)化進化。隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展,醫(yī)藥冷鏈物流技術(shù)不斷涌現(xiàn),同時在我國高度重視下,冷鏈物流標準逐漸完善。但我國醫(yī)藥健康仍存在體系不完善、物流成本高和技術(shù)、設(shè)施落后的問題。在市場機遇與現(xiàn)存問題面前,如何把握醫(yī)藥健康未來發(fā)展趨勢顯得尤為重要。廣東哥廷根小型豬原代肝細胞系
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1、原代細胞:ScienCell(中國區(qū)正規(guī)一級代理)人源和動物源各種原代細胞。
2、培養(yǎng)基:原代細胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。
3、細胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細胞實驗檢測試劑盒、細胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細胞裂解物等。
4、細胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標記、熒光素酶標記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細菌基因敲除、細胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實驗。