骨組織RNA提取方法及步驟：適用于快速提取骨組織細(xì)胞總RNA，使用獨有基因組DNA清理柱技術(shù)可有效清理電泳可見gDNA殘留，RNA可用于反轉(zhuǎn)錄PCR，熒光定量PCR等。骨組織堅硬、骨細(xì)胞密度低、而且外周基質(zhì)含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA難以分離，無法用傳統(tǒng)Trizol法進行高質(zhì)量提取。本方法采用獨有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液，并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖。同時獨特基因組DNA清理柱技術(shù)可以有效清理gDNA殘留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實驗。獨特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶，離心沉淀去除多糖和次級代謝產(chǎn)物，然后裂解混合物用乙醇調(diào)節(jié)RNA結(jié)合吸附到基因組DNA清理柱，然后RNA被選擇性洗脫濾過，吸附在基因組DNA清理柱上的殘留DNA無法洗脫連同柱子一起丟棄從而清理掉DNA。濾過的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后，RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除，較后低鹽的RNasefreeH20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。DNA提取的樣品準(zhǔn)備之生物組織：液氮勻漿法。濰坊無需氯仿RNA提取

RNA提取和DNA提取實驗中常見問題及過程中的注意事項：RNA提取和DNA提取實驗在分子生物學(xué)中比較常用，但有時會出現(xiàn)產(chǎn)量低、純度低、易降解等情況，RNA提取和DNA提取實驗中常見問題：產(chǎn)量低：如果您遇到的DNA/RNA產(chǎn)量低于您對樣品的預(yù)期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個裂解問題。不完全裂解是產(chǎn)量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的好的乙醇（100%200標(biāo)準(zhǔn)）稀釋緩沖液或添加到結(jié)合的步驟。劣質(zhì)乙醇或舊庫存可能已經(jīng)吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的DNA或RNA。濰坊無需氯仿RNA提取DNA提取的原則，核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子。

過柱法DNA提取的工作原理：獨特的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除，較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。1、采用離心吸附柱和緩沖液系統(tǒng)。樣品裂解后，DNA在高鹽條件下與硅膠膜結(jié)合，在低鹽、高PH值時從硅膠膜上洗脫下來。2、破壞紅細(xì)胞，通常利用紅細(xì)胞與白細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的差異，先使紅細(xì)胞裂解，經(jīng)離心后收集白細(xì)胞。3、白細(xì)胞裂使膜蛋白和核的蛋白變性，游離DNA，通常是采用離子型表面活性劑使蛋白質(zhì)變性。4、除去變性蛋白質(zhì)：通常采用蛋白沉淀劑沉淀變性蛋白質(zhì)，使DNA留在上清液中。5、在高鹽環(huán)境下使DNA從有機溶劑（如無水乙醇）中析出。

DNA提取方法：一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法：破碎細(xì)胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細(xì)胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。四.異丙醇沉淀法：基本同1法，只用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態(tài)）五.表面活性劑快速制備法：用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。六.加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應(yīng)。七.堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。DNA提取的主要分類：真核生物DNA、細(xì)菌DNA、質(zhì)粒DNA、細(xì)胞懸液DNA、組織DNA。

DNA提取的幾種方法介紹，濃鹽法：利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M氯納提取化鈉抽提，得到的DNP黏液與含有少量辛醇的氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA鈉鹽沉淀出來。也可用0.15MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白。兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些。DNA提取的過程需要嚴(yán)格控制溫度、時間和試劑用量等因素。RNA提取公司

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。濰坊無需氯仿RNA提取

離心柱法DNA提取：離心柱法主要原理是將對核酸有吸附作用的官能基團固定在離心柱模上，通過加入不同的裂解試劑、洗滌試劑并反復(fù)離心，以達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的，獲得純化的核酸。離心柱法DNA提取它的優(yōu)點是比傳統(tǒng)的酚氯法提取的純度高，有利于RNA保護，而且能進行微量操作，以其低廉的價格和相對便捷的操作，漸逐取代了傳統(tǒng)DNA提取方法，被高校科研所等市場普遍接受。RNA沉淀條件不合適：使用異丙醇沉淀RNA時，加入的異丙醇與提取液的比例偏高。溶液的pH值偏小，都容易使DNA形成沉淀。濰坊無需氯仿RNA提取

蘇州英澤生物醫(yī)藥科技有限公司坐落在張家港經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)(市高新技術(shù)創(chuàng)業(yè)服務(wù)中心)F幢3樓，是一家專業(yè)的生物醫(yī)藥和醫(yī)療領(lǐng)城內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓及相 關(guān)的技術(shù)服務(wù);化工原料及產(chǎn)品、生物儀器試劑(不含危化 品)、儀器儀表、電子產(chǎn)品的購銷;生物技 術(shù)推廣服務(wù);貨物或技術(shù)進出口(國家禁止或涉及行政審批的 貨物和技術(shù)進出口除外) (依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項目， 經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活 動) 一般項目:醫(yī)學(xué)研究和試驗發(fā)展;工業(yè)酶制劑研發(fā)(除依法須 能分準(zhǔn)機項目外公司。公司目前擁有專業(yè)的技術(shù)員工，為員工提供廣闊的發(fā)展平臺與成長空間，為客戶提供高質(zhì)的產(chǎn)品服務(wù)，深受員工與客戶好評。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括：RNA\DNA試劑盒，外泌體提取試劑盒，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，熒光定量PCR等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營宗旨，深受客戶好評。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德，樹立了良好的RNA\DNA試劑盒，外泌體提取試劑盒，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，熒光定量PCR形象，贏得了社會各界的信任和認(rèn)可。