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HE染色顯微鏡下見切片內(nèi)有大量水珠分析以及應(yīng)對(duì)原因:切片經(jīng)梯度乙醇處理后沒有完全脫水,導(dǎo)致二甲苯透明中性樹膠封固后殘留大量水分。對(duì)策:移去蓋玻片,用二甲苯溶解封固劑如中性樹膠。將切片置入新鮮的無水乙醇中,待切片重新脫水完全后,用新二甲苯透明,中性樹膠封固。所有用于脫水和透明的液體,在使用一定時(shí)間以后,應(yīng)即時(shí)更換。光鏡下切片某些區(qū)域難以聚焦分析以及應(yīng)對(duì)原因:蓋玻片上可能有封固切片的封固劑。對(duì)策:移去蓋玻片,重新用干凈的蓋玻片封片HE染色技術(shù)幾種常見的染色問題。陜西質(zhì)量好的HE染色檢測(cè)
HE染色結(jié)果判讀:細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。著色狀況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí),伊紅著色由淺變深。H-E染色評(píng)定標(biāo)準(zhǔn):(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均勻,無皺褶無刀痕;(2)染色核漿分明,紅藍(lán)適度,透明潔凈,封裱美觀。黑龍江靠譜的HE染色哪家好HE染色注意事項(xiàng)以及常規(guī)的流程解析。
HE染色就是用蘇木精和伊紅對(duì)細(xì)胞內(nèi)的核糖體和細(xì)胞質(zhì)染色的方法。H:Hematoxylin,蘇木精E:Eosin,伊紅蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿染料,可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色,被堿染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿。伊紅(,E)是一種酸染料,能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,被酸染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸。染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,***入蒸餾水,就可染色。 很多細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。 膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變時(shí),伊紅著色由淺變深。
HE染色等常規(guī)染色,組化或是熒光優(yōu)先推薦做石蠟切片。原因:石蠟切片對(duì)組織的形態(tài)保存比冰凍切片好,并且對(duì)抗原基本無影響。脂質(zhì)染色(油紅O染**odipy染色,尼羅紅染色)必須做冰凍切片,不能做石蠟切片。以下染色必須要新鮮或冷凍組織冰凍切片:ROS染**-半乳糖甘酶染色,ATP染色,膽固醇染色。如果標(biāo)本已經(jīng)放在-80°冰箱冷凍了之后又想要做石蠟切片,將標(biāo)本取出來千萬不要解凍直接放于固定液內(nèi)固定(在固定液內(nèi)邊解凍邊固定)。組織形態(tài)結(jié)構(gòu)保存完好順序:新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>組織-80°冷凍后投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定冰凍切片>組織-80°冷凍后直接冰凍切片。HE染色需要哪些材料及實(shí)驗(yàn)步驟。
HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項(xiàng):多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會(huì)被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過24小時(shí)。多聚甲醛可長(zhǎng)期存在于固定過的細(xì)胞或組織樣品中,固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時(shí)仍會(huì)有殘留,因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。HE染色是病理實(shí)驗(yàn)中比較用的一種基礎(chǔ)染色方法。西藏病理HE染色價(jià)格
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HE染色原理:一、細(xì)胞核染色原理:蘇木精為堿性天然染料,可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA,在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外。使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。二、細(xì)胞漿染色原理:細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物、細(xì)胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系,當(dāng)pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)4.7-5.0時(shí),胞漿對(duì)外不顯電性,此時(shí)酸或堿性染料不易染色。當(dāng)pH調(diào)到6.7-6.8時(shí),大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)pH值,表現(xiàn)酸性電離,而帶負(fù)電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現(xiàn)時(shí)胞核也被染色,核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點(diǎn)以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負(fù)電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷(陽離子)結(jié)合而使細(xì)胞漿染色,細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織,嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色,與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對(duì)比陜西質(zhì)量好的HE染色檢測(cè)