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外泌體的表征方法：根據(jù)藥物遞送系統(tǒng)(DDS)表征外泌體結(jié)構(gòu)至關(guān)重要，因?yàn)樗鼪Q定了DDS的特性，例如細(xì)胞或組織親和力、應(yīng)激反應(yīng)、吸收途徑和藥物釋放。2014年和2018年國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)(MISEV2018)提出了外泌體（包括研究和外泌體制備）應(yīng)滿足的基本要求...

分離外泌體的方法之超速離心：離心是一種利用不同的離心力根據(jù)顆粒成分的密度、大小和形狀沉淀顆粒成分的過程。超速離心是一種離心過程，較多使用6×106g離心力，有助于隔離更小的組件，例如，核糖體、蛋白質(zhì)、病毒、外泌體和其他EV。加速度（g）、旋轉(zhuǎn)半徑、樣品粘度和沉...

探針法qPCR試劑盒特點(diǎn)：細(xì)菌（Bacteria）廣義的細(xì)菌即為原核生物是指一大類細(xì)胞核無核膜包裹只存在稱作擬核區(qū)（nuclearregion)（或擬核）的裸露DNA的原始單細(xì)胞生物，包括真細(xì)菌（eubacteria）和古生菌（archaea）兩大類群。人們通...

逆轉(zhuǎn)錄酶實(shí)驗(yàn)流程：從細(xì)胞材料中提取RNA→RNA加入到含有逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、dNTPs的反應(yīng)體系中→退火，引物與RNA鏈配對(duì)→延伸，逆轉(zhuǎn)錄酶合成互補(bǔ)cDNA鏈變性→常規(guī)PCR反應(yīng)流程（變性、退火、延伸，如此多次循環(huán)）。RT-PCR“兩步法”與“一步法”RT-PC...

DNA提取的原則：1.保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；2.核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子；3.其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度；4.其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。DNA提取的樣品準(zhǔn)備：生物組織：一....

人體中也有逆轉(zhuǎn)錄過程，比如端粒的復(fù)制。端粒（telomere）是染色體末端的特殊結(jié)構(gòu)，由重復(fù)的DNA序列（TTAGGG）和核的蛋白組成，可以保護(hù)染色體末端，維持基因組完整性。端粒的末端是單鏈3'末端，形成一種緊湊的T環(huán)結(jié)構(gòu)，可保持其穩(wěn)定性。其表面覆蓋著Shel...

各類型試劑盒的原理：進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，反應(yīng)后洗滌微孔，就可以將體系中多余的物質(zhì)去除，微孔中只留下吸附在其上的原料和相應(yīng)的免疫復(fù)合物。此后可以采用多種指示方法進(jìn)行檢測(cè)。板式試劑來源于實(shí)驗(yàn)室，較初是為了提高手工反應(yīng)的效率而設(shè)計(jì)，現(xiàn)在也有自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行操作。板式試劑的特點(diǎn)...

逆轉(zhuǎn)錄的發(fā)現(xiàn)有重要的理論意義和實(shí)踐意義。對(duì)分子生物學(xué)的中心法則進(jìn)行了修正和補(bǔ)充。經(jīng)典的中心法則認(rèn)為：DNA的功能兼有遺傳信息的傳遞和表達(dá)，因此，DNA處于生命活動(dòng)的中心位置。逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象說明：至少在某些生物中，RNA同樣兼有遺傳信息傳遞和表達(dá)功能。修正后的中心法...

逆轉(zhuǎn)錄的端粒復(fù)制：逆轉(zhuǎn)錄經(jīng)常與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)，艾滋、乙肝等很多疾病也有逆轉(zhuǎn)錄過程。所以相關(guān)研究可以為很多疾病的研究和防治提供幫助。逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑就一直是藥物研發(fā)熱點(diǎn)，例如抗HIV的nevirapine。逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏校對(duì)（3'-5'核酸外切酶）功能，所以容易出...

骨組織RNA提取方法及步驟：頭一次使用前請(qǐng)先在漂洗液RW瓶加入指定量無水乙醇!取1ml裂解液CLB至離心管內(nèi)(如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解），在裂解液CLB中加入100μlP的LANTaid，顛倒混勻后65°C水浴中預(yù)熱。多個(gè)樣品按照比...

骨組織RNA提取方法及步驟：適用于快速提取骨組織細(xì)胞總RNA，使用獨(dú)有基因組DNA清理柱技術(shù)可有效清理電泳可見gDNA殘留，RNA可用于反轉(zhuǎn)錄PCR，熒光定量PCR等。骨組織堅(jiān)硬、骨細(xì)胞密度低、而且外周基質(zhì)含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA難以分離，無法用傳統(tǒng)...

DNA提取的基本步驟：1.細(xì)胞裂解與細(xì)胞裂解緩沖液裂解細(xì)胞膜；2.脂質(zhì)被洗滌劑和表面活性劑分解；3.通過添加蛋白酶消化蛋白質(zhì)；4.通過添加RNase消化RNA；5.通過加入濃鹽然后離心分離細(xì)胞碎片、消化蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNA；6.用冰冷的乙醇或異丙醇乙醇沉淀DN...

逆轉(zhuǎn)錄的端粒復(fù)制：逆轉(zhuǎn)錄經(jīng)常與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)，艾滋、乙肝等很多疾病也有逆轉(zhuǎn)錄過程。所以相關(guān)研究可以為很多疾病的研究和防治提供幫助。逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑就一直是藥物研發(fā)熱點(diǎn)，例如抗HIV的nevirapine。逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏校對(duì)（3'-5'核酸外切酶）功能，所以容易出...

microRNA提取方法及步驟：動(dòng)物組織（例如鼠肝腦）a.新鮮組織用解剖刀迅速切成小碎塊,根據(jù)處理組織的質(zhì)量，按照50-100mg加入1ml的比例加入Lysis/Bindingbuffer后電動(dòng)或者手動(dòng)徹底勻漿。或者在液氮中研磨組織成細(xì)粉后，取適量組織細(xì)粉（約...

磁珠法DNA提取：磁珠法的原理是在磁珠表面修飾有對(duì)核酸有吸附作用的特定活性官能基團(tuán)，通過不同的裂解液結(jié)合液洗滌液在特定的條件下能夠與目的物質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合，同時(shí)利用磁珠自身的磁性，在外磁場(chǎng)的作用下可以方便的實(shí)現(xiàn)定向移動(dòng)與富集，從而達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的，進(jìn)而...

該如何選擇高質(zhì)量、使用方便和廉價(jià)物美的試劑盒？生化診斷試劑盒的質(zhì)量是保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素之一。目前，由于臨床生化自動(dòng)分析儀器的普及應(yīng)用，商品化的不斷涌現(xiàn)。因此，如何選擇和評(píng)價(jià)高質(zhì)量的、符合實(shí)驗(yàn)室分析要求的，以及使用方便和價(jià)廉的試劑盒，不只是檢驗(yàn)工...

試劑盒生產(chǎn)流程：包被：1、包被前預(yù)吸檢查頭頭是否合格，水流是否一同，不一同者應(yīng)geng換頭頭，包被應(yīng)選用好的頭頭，每包被一塊板，應(yīng)將頭頭套緊，并且在包被的過程中要留意檢查吸液是否一同，在包被過程中若出現(xiàn)任何小問題，都應(yīng)將此塊板做出記號(hào)，以便后期組裝入庫時(shí)篩選。...

逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成。此過程中，核酸合成與轉(zhuǎn)錄（DNA到RNA）過程與遺傳信息的流動(dòng)方向（RNA到DNA）相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄與反轉(zhuǎn)錄嚴(yán)格意義上來說沒有什么區(qū)別，但...

如何選擇DNA提取試劑盒？實(shí)驗(yàn)室工作中，經(jīng)常會(huì)需要用到純化的DNA，這時(shí)我們通常需要使用一個(gè)商業(yè)的DNA提取試劑盒對(duì)目的DNA進(jìn)行分離純化。市面上有很多類型的提取試劑盒，當(dāng)使用不太熟悉的樣本類型時(shí)，選擇合適的盒子是尤為關(guān)鍵的，試劑盒組分：目前大多數(shù)DNA提取試...

莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)具有許多優(yōu)點(diǎn)。首先，該技術(shù)可以在樣品數(shù)量較少的情況下擴(kuò)增RNA分子，從而避免了RNA樣品的純化和濃縮操作。其次，莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)可以特異性地?cái)U(kuò)增目標(biāo)RNA分子，避免了隨機(jī)引物引起的非特異擴(kuò)增，從而提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。此外，莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技...

microRNA提取方法及步驟：室溫放置5分鐘以充分分離核酸蛋白復(fù)合物。加入200μl氯仿，劇烈振蕩15秒。室溫放置2-3分鐘，13，000rpm離心10分鐘。小心取上清（約600μl）轉(zhuǎn)入到新的離心管，加入1.5倍體積的無水乙醇（必須是室溫的，通常900μl...

外泌體試劑盒原理：傳統(tǒng)的外泌體研究，基本都是用WB之類來檢測(cè)和表征外泌體，比如用SDS-PAGE電泳可分析Exosome中蛋白的大致含量及種類（通過條帶的位置和條帶的粗細(xì)）；Western-Blot可以檢測(cè)Exosome中某特定蛋白的表達(dá)情況，就跟我們檢測(cè)其他...

試劑盒生產(chǎn)流程：包被：1、包被前預(yù)吸檢查頭頭是否合格，水流是否一同，不一同者應(yīng)geng換頭頭，包被應(yīng)選用好的頭頭，每包被一塊板，應(yīng)將頭頭套緊，并且在包被的過程中要留意檢查吸液是否一同，在包被過程中若出現(xiàn)任何小問題，都應(yīng)將此塊板做出記號(hào)，以便后期組裝入庫時(shí)篩選。...

該如何選擇高質(zhì)量、使用方便和廉價(jià)物美的試劑盒？穩(wěn)定性試驗(yàn)：試劑盒的穩(wěn)定性是指試劑盒試劑的不同狀態(tài)在不同條件貯存后所保持其測(cè)定準(zhǔn)確性的性能。生產(chǎn)廠家在試劑盒的研制過程中，都已做過穩(wěn)定性試驗(yàn)，并加有適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑。但用戶在選擇和鑒定試劑盒時(shí)，仍需要檢查其穩(wěn)定性，尤其...

逆轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄過程：基因的轉(zhuǎn)錄是由RNA聚合酶催化進(jìn)行的。基因的上游具有結(jié)合RNA聚合酶的區(qū)域，叫作啟動(dòng)子。啟動(dòng)子是一段具有特定序列的DNA，具有和RNA聚合酶特異性結(jié)合的位點(diǎn)，決定了基因轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)。RNA聚合酶與啟動(dòng)子結(jié)合后，在特定區(qū)域?qū)NA雙螺旋兩條鏈...

該如何選擇高質(zhì)量、使用方便和廉價(jià)物美的試劑盒？生化診斷試劑盒的質(zhì)量是保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素之一。目前，由于臨床生化自動(dòng)分析儀器的普及應(yīng)用，商品化的不斷涌現(xiàn)。因此，如何選擇和評(píng)價(jià)高質(zhì)量的、符合實(shí)驗(yàn)室分析要求的，以及使用方便和價(jià)廉的試劑盒，不只是檢驗(yàn)工...

現(xiàn)在都有哪些類型的試劑盒？根據(jù)不同的指示反應(yīng)原理和試劑形態(tài)，也有另外的分類方法。比如免疫試劑中，目前市面上流行的有酶聯(lián)免疫試劑（ELISA）、化學(xué)發(fā)光試劑（CLIA）、熒光免疫試劑（FIA）和膠體金（金標(biāo)）試劑等。這些試劑主要在指示試劑上有所不同，但與待測(cè)物質(zhì)...

探針法qPCR試劑盒具有下列特點(diǎn)：1.即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。3.提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。4.特異性高，引物是根據(jù)細(xì)菌高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他病原菌DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。5.本產(chǎn)品足夠50次20μL體...

microRNA提取方法及步驟：近年來對(duì)RNA干擾和調(diào)節(jié)性小RNA的普遍研究迫切需要一種能有效提取15--30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的方法。但是傳統(tǒng)的RNA提取方法如硅膠膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小...

使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉(zhuǎn)子的選擇。“擺動(dòng)桶”(SW)轉(zhuǎn)子和“定角”(FA)轉(zhuǎn)子，這些轉(zhuǎn)子的幾何形狀根本不同，因此沉降特性也不同。這些轉(zhuǎn)子之間的主要區(qū)別在于：FA轉(zhuǎn)子，與旋轉(zhuǎn)半徑相比，沉積顆粒的較大路徑長(zhǎng)度通常較小，允許近似恒定遷移率并簡(jiǎn)化描述...