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RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄中模板的選擇：在RT-PCR實(shí)驗(yàn)中，選擇總RNA或純化的mRNA作為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄十分重要。mRNA雖然能提供略高的靈敏度，但總RNA經(jīng)常使用，具有較mRNA更重要的優(yōu)勢。首先，其過程需要較少的純化流程，這保證了更好的回收模板和更好的把結(jié)果標(biāo)...

磁珠法提取DNA提取方法：實(shí)驗(yàn)步驟，磁珠法核酸提取一般可以分為四步：裂解——結(jié)合——洗滌——洗脫。裂解：核酸必須從細(xì)胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來，細(xì)胞裂解可通過機(jī)械作用、化學(xué)作用、酶作用等方法實(shí)現(xiàn)。其中，酶作用主要是通過加入溶菌酶或蛋白酶（蛋白酶K、植物蛋白酶或...

RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄中模板的選擇：在RT-PCR實(shí)驗(yàn)中，選擇總RNA或純化的mRNA作為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄十分重要。mRNA雖然能提供略高的靈敏度，但總RNA經(jīng)常使用，具有較mRNA更重要的優(yōu)勢。首先，其過程需要較少的純化流程，這保證了更好的回收模板和更好的把結(jié)果標(biāo)...

該如何選擇高質(zhì)量、使用方便和廉價(jià)物美的試劑盒？干擾物實(shí)驗(yàn)：通過試驗(yàn)觀察試劑對干擾物影響的耐受程度。通常取一混合標(biāo)本，從中分出幾份，分別加入不同已知量的干擾物，然后測定出不同干擾物濃度下的待測物量，比較其測定結(jié)果，從各自的偏差程度即可了解這一干擾在試劑盒測定中的...

當(dāng)外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷...

試劑盒生產(chǎn)流程：包被：1、包被前預(yù)吸檢查頭頭是否合格，水流是否一同，不一同者應(yīng)geng換頭頭，包被應(yīng)選用好的頭頭，每包被一塊板，應(yīng)將頭頭套緊，并且在包被的過程中要留意檢查吸液是否一同，在包被過程中若出現(xiàn)任何小問題，都應(yīng)將此塊板做出記號，以便后期組裝入庫時(shí)篩選。...

現(xiàn)在都有哪些類型的試劑盒？ELISA試劑常采用辣根過氧化物酶（HRP）進(jìn)行顯色反應(yīng)，需要酶標(biāo)儀在對應(yīng)波長檢測吸光度，通過吸光度來指標(biāo)待測物質(zhì)含量。這些指示反應(yīng)會在一定程度上影響試劑的性能，所以不同種類的試劑有些適合快速檢測，有些適合定量檢測，有些適合高通量篩查...

什么是RNA提取？RNA提取是指從樣品中純化RNA的過程。RNA提取的常規(guī)方法稱為硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取。Guanidiniumthiocyanate使蛋白質(zhì)變性。此外，它破壞水分子的氫鍵并用作離液劑。RNA提取中使用一種特殊試劑，稱為三試劑。它含有硫氰酸胍...

DNA提取的基本步驟：1.細(xì)胞裂解與細(xì)胞裂解緩沖液裂解細(xì)胞膜；2.脂質(zhì)被洗滌劑和表面活性劑分解；3.通過添加蛋白酶消化蛋白質(zhì)；4.通過添加RNase消化RNA；5.通過加入濃鹽然后離心分離細(xì)胞碎片、消化蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNA；6.用冰冷的乙醇或異丙醇乙醇沉淀DN...

血漿DNA與血漿游離DNA提取試劑有較高的提取得率。DNA核酸提取得率的確定，常用的是使用紫外分光光度計(jì)的方法。但是，血清、血漿dna樣本中游離核酸含量較低，如果直接用紫外法檢測，得出的數(shù)值并不準(zhǔn)確，而且多次測量的結(jié)果會變異很大。關(guān)于提取得率，Qiagen的研...

DNA提取定量：分光光度法：測定DNA在A260的光吸收，計(jì)算濃度。雙鏈DNA：A260*稀釋倍數(shù)*50（ug/ml）單鏈DNA：A260*稀釋倍數(shù)*40（ug/ml）單鏈核苷酸DNA：A260*稀釋倍數(shù)*20（ug/ml）.瓊脂糖平板法：在含溴乙錠的瓊脂糖平...

磁珠法提取DNA提取方法：洗滌：核酸的高電荷磷酸骨架使其比蛋白質(zhì)、多糖、脂肪等其他生物大分子物質(zhì)更具親水性，根據(jù)它們理化性質(zhì)的差異，用選擇性沉淀、層析、密度梯度離心等方法可將核酸分離、純化。用無水乙醇沉淀DNA，這是實(shí)驗(yàn)中較常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點(diǎn)是...

逆轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV）從MoloneyMurineLeukemiaVirus分離出來，可用于合成首先鏈cDNA、制作cDNA探針、RNA轉(zhuǎn)錄、測序和RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。本酶是通過點(diǎn)突變使RNaseH活性缺失，所以它具有的DNA聚合酶的活性與野生型相同，同時(shí)其延...

DNA試劑盒是一種常用的實(shí)驗(yàn)工具，用于從樣品中提取DNA。它可以應(yīng)用于各種領(lǐng)域的DNA研究，例如醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、犯罪學(xué)等。DNA試劑盒使用流程：樣品準(zhǔn)備：首先，需要準(zhǔn)備好樣品。樣品可以是各種生物組織、細(xì)胞、血液等。樣品的質(zhì)量直接影響到提取DNA的效果，因此需要注...

現(xiàn)在都有哪些類型的試劑盒？分子試劑的原理是通過堿基互補(bǔ)配對原則，使待測物質(zhì)（一般是擴(kuò)增后的單鏈DNA或RNA）與試劑組分發(fā)生分子生物學(xué)反應(yīng)，然后通過指示試劑判斷含量。這些試劑的特點(diǎn)就是對應(yīng)待測物質(zhì)的不同性質(zhì)，可以從不同的方法學(xué)角度設(shè)計(jì)試劑，有時(shí)候同一種待測物質(zhì)...

反轉(zhuǎn)錄酶的注意事項(xiàng)，隨機(jī)引物：適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，首先鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的...

血漿DNA與血漿游離DNA提取試劑的選擇方法：血漿DNA，又稱血液循環(huán)DNA、游離DNA，是指血液中游離于細(xì)胞外的DNA，其來源主要有三：白細(xì)胞崩解釋放的DNA、壞死組織特別是腫組織釋放入血液的DNA和染上病毒、細(xì)菌的DNA。近幾年來，隨著基因診斷技術(shù)的發(fā)展，...

DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化芐具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細(xì)胞壁的特性。本制品利用了氯化芐的這一特性，將植物樣品凍結(jié)融解后，再使用PipetTip的前面將植物樣品在Microtube壁...

外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產(chǎn)生溫和影響而且可以產(chǎn)生中性的pH值。由此，出...

逆轉(zhuǎn)錄過程是病毒的復(fù)制形式之一，如RNA病毒中的逆轉(zhuǎn)錄病毒，DNA病毒中的擬逆轉(zhuǎn)錄病毒的復(fù)制均需要經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄過程在真核細(xì)胞中也同樣存在，例如逆轉(zhuǎn)座子和端粒DNA的延長均存在逆轉(zhuǎn)錄過程，需逆轉(zhuǎn)錄酶的催化，端粒酶即為真核細(xì)胞中的逆轉(zhuǎn)錄酶。逆轉(zhuǎn)錄過程的揭示是...

microRNA提取方法及步驟：頭一次使用前請先在70%乙醇、WashSolution1瓶和WashSolution2/3瓶中加入指定量乙醇！a.收集

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法：立刻將混合物(每次小于720μl，多可以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心2分鐘，棄掉廢液。確保離心后液體全部濾過去，膜上沒有殘留，如有必要，可以加大離心力和離心時(shí)間。加700μ...

磁珠法提取DNA提取方法：洗滌：核酸的高電荷磷酸骨架使其比蛋白質(zhì)、多糖、脂肪等其他生物大分子物質(zhì)更具親水性，根據(jù)它們理化性質(zhì)的差異，用選擇性沉淀、層析、密度梯度離心等方法可將核酸分離、純化。用無水乙醇沉淀DNA，這是實(shí)驗(yàn)中較常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點(diǎn)是...

miRNA的加尾法逆轉(zhuǎn)錄和qPCR，miRNA與mRNA不同，成熟的miRNA的長度只有20nt左右，非常短，通常正向引物就足以覆蓋其全長甚至有余，反向引物就無處安放了。那么如何實(shí)現(xiàn)miRNA的qPCR擴(kuò)增呢？解決方案就是在逆轉(zhuǎn)錄的時(shí)候設(shè)法增加逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物長度。...

該如何選擇高質(zhì)量、使用方便和廉價(jià)物美的試劑盒？測定線性范圍：生化診斷試劑盒的線性測定范圍既是衡量其質(zhì)量的重要指標(biāo)，也是保證正確使用和鑒定試劑盒的關(guān)鍵指標(biāo)之一。一般試劑盒的線性范圍要求能覆蓋臨床上的參考值和常見疾病的醫(yī)學(xué)決定水平，以減少標(biāo)本稀釋重測的機(jī)會。一旦線...

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法：立刻將混合物(每次小于720μl，多可以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心2分鐘，棄掉廢液。確保離心后液體全部濾過去，膜上沒有殘留，如有必要，可以加大離心力和離心時(shí)間。加700μ...

外泌體的構(gòu)成：外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年，Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌的exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲，并且其攜帶的mRNA成分可以進(jìn)入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì)，不只是mRNA，exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性，...

過柱法DNA提取的工作原理：獨(dú)特的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除，較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組D...

加尾法逆轉(zhuǎn)錄的較大特點(diǎn)在于：對于抽提純化的miRNA，進(jìn)行無差別加尾。因此，如果用戶需要對樣本中的多個(gè)miRNA進(jìn)行考察，一次逆轉(zhuǎn)錄即可完成對所有qPCR模板的制備。qPCR引物方面，miRNA以及內(nèi)參的反向引物都是通用引物R，不同的只是正向引物。因此在設(shè)計(jì)加...

試劑盒是用于盛放檢測化學(xué)成分、藥物殘留、病毒種類等化學(xué)試劑的盒子。它一般在醫(yī)院、制藥企業(yè)使用。試劑盒使用示例：試劑盒的產(chǎn)生正是為了使實(shí)驗(yàn)人員能夠擺脫繁重的試劑配制及優(yōu)化過程，所以試劑盒中一般配備有相應(yīng)的使用說明書，用戶按照說明書只需少量的優(yōu)化即可得到滿意的結(jié)果...