配制培養基的原則:調節氧化還原電位(Eh)各種微生物對培養基的Eh要求不同。適宜好氧微生物生長的Eh值一般為+0.3~+0.4V,厭氧微生物只能在+0.1V以下生長,因此,培養好氧微生物必須保證氧的供應,可在培養基中加入氧化劑提高Eh值。調節滲透壓多數微生物能耐受較大范圍滲透壓的變化。培養基中營養物質的濃度過大,會使滲透壓過高,使細胞發生質壁分離而抑制微生物生長。低滲溶液則使細胞吸水膨脹易破裂,因此,配制培養基時要掌握營養物質的濃度。常在培養基中加人適量的Nacl以提高滲透壓。原料來源的選擇力求節約:配制培養基還應遵循力求節約的原則,盡量選用價格便宜、來源方便的原料。特別是在工業發酵中,培養基用量大,更應注意利用低成本的原料,降低產品成本。溶解不完全需延長加熱時間或降低投料量。不銹鋼內桶培養基制備器品牌
培養基防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、病菌及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其后的每6個月進行驗證,后者應在每次除菌前、后進行驗證工作(至少應在除菌后進行一次)。另外,應將有毒區與無毒區嚴格分開,并有各自自立的空氣凈化系統及孵室,有毒區對無毒區應保持相對負壓,防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。新疆進口培養基制備器真空抽濾不暢應清潔濾膜及檢查氣密性。
在制備培養基的過程中,首先要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據不同的情況,經過一定的處理,洗刷干凈。有的還要進行包裝,經過滅菌等準備就緒后,才能使用。新購的玻璃器皿:除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業鹽酸中數小時,使游離的堿性物質除去,再以流水沖凈。對容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉動容器使其內部表面均沾有鹽酸,數分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上將水空干,即可使用。
培養基的脫氣:必要時,在使用前將養基放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15min,加熱時松開容器蓋子;加熱后蓋緊蓋子,并迅速冷卻至使用溫度。3.添加成分的加入:對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47℃~50℃時加入,滅菌的添加成分加入前應冷卻至室溫,避免冷的液體會造成瓊脂凝膠或形成片狀物。4.培養基的棄置:所有污染和未使用的培養基的棄置應采用安全的方式,并符合相關法律法規的規定。每批培養基應另外分裝20ml培養基于一小玻璃瓶中,隨該批培養基同時滅菌,以為測定該批培養基較終pH之用。在選購培養基制備器時,快速加熱和冷卻能力是重要考量因素,直接影響培養基的質量、實驗效率及操作便利性。
基礎培養基各種微生物的營養要求雖不相同,但多數微生物需要的基本營養物質相同。按一般微生物生長繁殖所需要的基本營養物質配制的培養基即成為基礎培養基。牛肉膏蛋白胨培養基就是很常用的基礎培養基,它可作為一些特殊培養基的基本成分,再根據某種微生物的特殊要求,在基礎培養基中添加所需營養物質。根據培養基的特殊用途可分為基礎培養基、加富培養基、選擇培養基和鑒別培養基等?;A培養基:含有細菌生長繁殖所需的基本營養物質,可供大多數細菌生長。在牛肉浸液中加入適量的蛋白胨、氯化鈉、磷酸鹽,調節pH7.2~7.6,經滅菌處理后,即為基礎液體培養基;如再加入0.3%~0.5%的瓊脂,則為基礎半固體培養基;加入1%~2%的瓊脂,則為基礎固體培養基。牛肉膏蛋白胨培養基就是很常用的基礎培養基,它可作為一些特殊培養基的基本成分,再根據某種微生物的特殊要求,在基礎培養基中添加所需營養物質。物料殘留嚴重需優化清洗程序周期設定。黑龍江全自動培養基制備器
高溫下長時間停留會導致瓊脂過度凝固、糖類焦化或蛋白質變性。不銹鋼內桶培養基制備器品牌
培養基pH的初步調正:因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,培養基各成分完全溶解后,應進行PH的初步調正。例如,牛肉浸液約可降低pH0.2,而腸浸液pH卻會有明顯的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的較終PH,保證培養基的質量。PH調整后,還應將培養基煮沸數分鐘,以利培養基沉淀物的析出。培養基的過濾澄清:液體培養基必須澄清,瓊脂培養基也應透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法,濾紙應折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。不銹鋼內桶培養基制備器品牌